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M110935

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题求助

最近将PET-32a转化BL21,转进去后挑了5个单菌落,然后小提质粒酶切鉴定。但是酶切的结果是切不出任何的条带,并且转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带。这说明我的体系是没有问题的,那为什么挑取的这5个菌落,小提质粒酶切却切不出来东西呢?大家帮忙分析下,谢谢
P.S  我用的是天根的质粒小提试剂盒
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

是不是试剂盒的问题
总有一天我要修改用户名。
7楼2012-09-04 20:04:43
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查看全部 12 个回答

windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-04 19:13:02
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-05 14:00:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题,但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带,这说明你或许没有转化进去,如果确定转化进去了,那你就要真的考虑你的酶切体系是否正确,如果体系合理,那酶切结果会理想的。祝好运。
只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-09-04 15:23:24
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1 2012-09-05 08:15:14
你可以先做一下通用引物的质粒PCR,用没有连接的质粒做对照。
如果,可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切,点样时候多点些。有时候不是没切开,是你压根看不到。
3楼2012-09-04 15:50:55
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M110935

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-09-04 15:23:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题,但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带,这说明你或许没有转化进去,如果确定转化进去了,那你就要真的考虑你的酶切体系是 ...

嗯,下午我也考虑到可能压根没有转进去,所以晚上在重新转化,希望成功
4楼2012-09-04 19:12:53
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