24小时热门版块排行榜    

查看: 1409  |  回复: 11
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

M110935

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题求助

最近将PET-32a转化BL21,转进去后挑了5个单菌落,然后小提质粒酶切鉴定。但是酶切的结果是切不出任何的条带,并且转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带。这说明我的体系是没有问题的,那为什么挑取的这5个菌落,小提质粒酶切却切不出来东西呢?大家帮忙分析下,谢谢
P.S  我用的是天根的质粒小提试剂盒
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-09-04 15:23:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题,但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带,这说明你或许没有转化进去,如果确定转化进去了,那你就要真的考虑你的酶切体系是 ...

嗯,下午我也考虑到可能压根没有转进去,所以晚上在重新转化,希望成功
4楼2012-09-04 19:12:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-04 19:13:02
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-05 14:00:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题,但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带,这说明你或许没有转化进去,如果确定转化进去了,那你就要真的考虑你的酶切体系是否正确,如果体系合理,那酶切结果会理想的。祝好运。
只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-09-04 15:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1 2012-09-05 08:15:14
你可以先做一下通用引物的质粒PCR,用没有连接的质粒做对照。
如果,可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切,点样时候多点些。有时候不是没切开,是你压根看不到。
3楼2012-09-04 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 15:50:55
你可以先做一下通用引物的质粒PCR,用没有连接的质粒做对照。
如果,可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切,点样时候多点些。有时候不是没切开,是你压根看不到。

关键最近这个PCR老是出问题,阴性的也能扩出目的条带。但是酶切却什么也没有,
5楼2012-09-04 19:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 10/500 2026-03-20 15:58 by 蔡诚
[考研] 274求调剂 +8 S.H1 2026-03-18 8/400 2026-03-20 11:53 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +6 吃吃吃才有意义 2026-03-19 6/300 2026-03-20 10:47 by 尽舜尧1
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-18 5/250 2026-03-20 09:00 by ZHANG0tao
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
信息提示
请填处理意见