24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1449  |  回复: 11
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

M110935

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题求助

最近将PET-32a转化BL21,转进去后挑了5个单菌落,然后小提质粒酶切鉴定。但是酶切的结果是切不出任何的条带,并且转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带。这说明我的体系是没有问题的,那为什么挑取的这5个菌落,小提质粒酶切却切不出来东西呢?大家帮忙分析下,谢谢
P.S  我用的是天根的质粒小提试剂盒
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-09-04 15:23:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题,但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带,这说明你或许没有转化进去,如果确定转化进去了,那你就要真的考虑你的酶切体系是 ...

嗯,下午我也考虑到可能压根没有转进去,所以晚上在重新转化,希望成功
4楼2012-09-04 19:12:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-04 19:13:02
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-05 14:00:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题,但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带,这说明你或许没有转化进去,如果确定转化进去了,那你就要真的考虑你的酶切体系是否正确,如果体系合理,那酶切结果会理想的。祝好运。
只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-09-04 15:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1 2012-09-05 08:15:14
你可以先做一下通用引物的质粒PCR,用没有连接的质粒做对照。
如果,可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切,点样时候多点些。有时候不是没切开,是你压根看不到。
3楼2012-09-04 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 15:50:55
你可以先做一下通用引物的质粒PCR,用没有连接的质粒做对照。
如果,可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切,点样时候多点些。有时候不是没切开,是你压根看不到。

关键最近这个PCR老是出问题,阴性的也能扩出目的条带。但是酶切却什么也没有,
5楼2012-09-04 19:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 071000生物学调剂求助 +16 zzzzwww 2026-04-09 19/950 2026-04-10 15:22 by Kilig0317
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +7 你让我怎么荔枝 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:17 by hemengdong
[考研] 中科院总分315求调剂 +7 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-10 15:07 by Kilig0317
[考研] 296求调剂 +5 汪!?! 2026-04-10 6/300 2026-04-10 14:35 by hemengdong
[考研] 080500求调剂 +14 黄宇博 2026-04-06 14/700 2026-04-10 13:09 by vgtyfty
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550, 2026-04-10 7/350 2026-04-10 11:37 by may_新宇
[考研] 293求调剂 +4 勇远库爱314 2026-04-06 4/200 2026-04-10 11:00 by 高维春
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 0703化学 +31 妮妮ninicgb 2026-04-04 35/1750 2026-04-09 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 化学308分求调剂 +21 你好明天你好 2026-04-07 23/1150 2026-04-08 22:32 by 凯凯要变帅
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 一志愿华中农业大学0710(A)初试329分 求调剂 +5 一名26考研生 2026-04-04 5/250 2026-04-07 08:54 by 18828373951
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 283分求调剂 +7 小聂爱学习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 21:51 by hemengdong
信息提示
请填处理意见