应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切问题求助
121/2返回列表12下一页
查看: 1730  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

M110935

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切问题求助

最近将PET-32a转化BL21，转进去后挑了5个单菌落，然后小提质粒酶切鉴定。但是酶切的结果是切不出任何的条带，并且转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带。这说明我的体系是没有问题的，那为什么挑取的这5个菌落，小提质粒酶切却切不出来东西呢？大家帮忙分析下，谢谢
P.S  我用的是天根的质粒小提试剂盒
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-04 14:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-04 19:13:02
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-05 14:00:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题，但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带，这说明你或许没有转化进去，如果确定转化进去了，那你就要真的考虑你的酶切体系是否正确，如果体系合理，那酶切结果会理想的。祝好运。
赞一下 回复此楼
只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-09-04 15:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
M110935: 金币+1 2012-09-05 08:15:14
你可以先做一下通用引物的质粒PCR，用没有连接的质粒做对照。
如果，可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切，点样时候多点些。有时候不是没切开，是你压根看不到。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-04 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-09-04 15:23:24
转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带,那只是说明你的质粒没问题，但不能说明你的体系没问题。而你转化之后酶切却没条带，这说明你或许没有转化进去，如果确定转化进去了，那你就要真的考虑你的酶切体系是 ...

嗯，下午我也考虑到可能压根没有转进去，所以晚上在重新转化，希望成功
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-04 19:12:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 15:50:55
你可以先做一下通用引物的质粒PCR，用没有连接的质粒做对照。
如果，可以做出来。那么把你质粒浓度提高酶切，点样时候多点些。有时候不是没切开，是你压根看不到。

关键最近这个PCR老是出问题，阴性的也能扩出目的条带。但是酶切却什么也没有，
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-04 19:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

和平信

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
M110935: 金币+1 2012-09-05 08:15:00
挑菌后检测步骤：1、质粒pcr
2、小提质粒，跑胶，看是否提出来了
3、按照酶切体系进行酶切。
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-04 19:43:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)
是不是试剂盒的问题
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
7楼2012-09-04 20:04:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M110935

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 137167741 at 2012-09-04 20:04:43
是不是试剂盒的问题

我也怀疑试剂盒有问题，每次提出来浓度都很低，是天根的
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-05 08:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以尝试一下换TAKARA的
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
9楼2012-09-05 08:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by M110935 at 2012-09-05 08:15:46
我也怀疑试剂盒有问题，每次提出来浓度都很低，是天根的...

试剂盒提取的质粒纯度很高，但是量比较少。你提质粒是可以把菌液的量加大，其他的试剂相应增加。
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
10楼2012-09-05 10:41:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 M110935 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭