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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 赞同哦 2012-09-05 14:01:39
M110935: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-09-05 14:11:27
额,看了上面的回答有点无语,楼主注意一下一下几点:
1 首先检查感受态质量,建议做一个对照试验,找个以前能转化出来的质粒作对照。
2 质粒转化只需要加1微升足以,至于步骤严格按照传统方法进行,另外需要说明的是,PET系列载体是原核表达载体,拷贝数比一般质粒要低很多,转化前最好测一下质粒浓度,保证有50ng转化就行了。
3 还是拷贝数的问题,由于PET载体的特殊性,提取质粒收菌要非常多,一般小提收菌要在6毫升以上,而且菌液还要浓一些,就这样,提取的质粒浓度都不是非常大,所以也有可能是收菌太少导致质粒浓度过低看不出条带。
4 转化过程本身一般不会有问题,容易有问题的就是感受态和抗生素,还是建议做对照来排除这两个因素。
11楼2012-09-05 11:24:13
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M110935

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-05 11:24:13
额,看了上面的回答有点无语,楼主注意一下一下几点:
1 首先检查感受态质量,建议做一个对照试验,找个以前能转化出来的质粒作对照。
2 质粒转化只需要加1微升足以,至于步骤严格按照传统方法进行,另外需要说明 ...

非常感谢,真的很有帮助。我会再试试
12楼2012-09-05 14:11:51
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