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hezhihao_333

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于菌落pcr

最近在做最基础的连接转化，每次转化后，氨苄板上也长菌，挑去单个菌落摇菌，做菌液pcr，出来的片段与目的片段大小有差别，我要的是1000bp左右的，但出来的却是700bp左右的，而且如果电泳时间长了的话，条带也没有了，各位帮帮忙，看看是什么情况？
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1楼 2012-08-10 23:35:45
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
★
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电泳时间长了条带会不见？这是什么道理。。。
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2楼2012-08-11 09:02:44
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damaomao

禁虫 (正式写手)
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3楼2012-08-11 09:04:52
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damaomao

禁虫 (正式写手)
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4楼2012-08-11 09:05:45
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王贤卓

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-08-11 09:02:44
电泳时间长了条带会不见？这是什么道理。。。

pcr产物跑到底了。。
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5楼2012-08-11 10:34:15
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lillian菲

银虫 (小有名气)
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-13 15:02:49
你好，请问你做的转化长菌，有没有涂X-gal和IPTG做蓝白斑筛选了吗？说不定你挑的是假阳性单菌落
还有PCR电泳时可换个比较指示性比较清楚的Marker，也有可能是电泳不准确的原因，可以送去测序看看，这个比较准确
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6楼2012-08-11 15:31:28
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 王贤卓 at 2012-08-11 10:34:15
pcr产物跑到底了。。...

这。。。随便一个东西跑久了也会跑出去的。。。原帖这样写会误导的。。。
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7楼2012-08-11 17:51:34
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zy晨曦

新虫 (小有名气)
★
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建议你改一下胶的浓度
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8楼2012-08-11 18:12:22
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sd3824289

木虫 (正式写手)
★
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700bp的片段用1%的凝胶就可以的！至于片段大小不对，我建议再挑选几个克隆看看！一般出现这种情况的概率不太大！
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10楼2012-08-12 08:44:25
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chicharito

银虫 (小有名气)
★
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把700bp的条带送去测序，看看是什么东西。
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11楼2012-08-12 17:02:36
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angie8610

铁虫 (小有名气)
★
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可能是连接的片段不对吧，做PCR检测有一点不准确，建议做酶切！
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12楼2012-08-13 09:40:41
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
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你再酶切看看，能不能出现连接的两个条带呢，酶切最保险了
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13楼2012-08-13 10:18:46
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zy晨曦9楼
2012-08-11 19:00   回复  
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