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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hezhihao_333

新虫 (初入文坛)


[交流] 关于菌落pcr

最近在做最基础的连接转化,每次转化后,氨苄板上也长菌,挑去单个菌落摇菌,做菌液pcr,出来的片段与目的片段大小有差别,我要的是1000bp左右的,但出来的却是700bp左右的,而且如果电泳时间长了的话,条带也没有了,各位帮帮忙,看看是什么情况?
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hzlatqh

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
电泳时间长了条带会不见?这是什么道理。。。
2楼2012-08-11 09:02:44
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damaomao

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼2012-08-11 09:04:52
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damaomao

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2012-08-11 09:05:45
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王贤卓

金虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-08-11 09:02:44
电泳时间长了条带会不见?这是什么道理。。。

pcr产物跑到底了。。
5楼2012-08-11 10:34:15
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lillian菲

银虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-13 15:02:49
你好,请问你做的转化长菌,有没有涂X-gal和IPTG做蓝白斑筛选了吗?说不定你挑的是假阳性单菌落
还有PCR电泳时可换个比较指示性比较清楚的Marker,也有可能是电泳不准确的原因,可以送去测序看看,这个比较准确
6楼2012-08-11 15:31:28
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hzlatqh

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王贤卓 at 2012-08-11 10:34:15
pcr产物跑到底了。。...

这。。。随便一个东西跑久了也会跑出去的。。。原帖这样写会误导的。。。
7楼2012-08-11 17:51:34
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zy晨曦

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议你改一下胶的浓度
8楼2012-08-11 18:12:22
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sd3824289

木虫 (正式写手)



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700bp的片段用1%的凝胶就可以的!至于片段大小不对,我建议再挑选几个克隆看看!一般出现这种情况的概率不太大!
10楼2012-08-12 08:44:25
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chicharito

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把700bp的条带送去测序,看看是什么东西。
11楼2012-08-12 17:02:36
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angie8610

铁虫 (小有名气)



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可能是连接的片段不对吧,做PCR检测有一点不准确,建议做酶切!
12楼2012-08-13 09:40:41
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sarah-miao

银虫 (正式写手)



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你再酶切看看,能不能出现连接的两个条带呢,酶切最保险了
13楼2012-08-13 10:18:46
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zy晨曦9楼
2012-08-11 19:00   回复  
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