应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA电泳的一些疑惑
151/2返回列表12下一页
查看: 4957  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

vivian26

银虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA电泳的一些疑惑

作为分子生物学的初学者，我最近准备做RNA电泳，有一些疑惑，在这里向各位大人们请教，希望得到解答。：
1、RNA电泳是否可以直接使用琼脂糖胶？我看到很多人说应该使用变性胶。
2、RNA电泳的loading buffer与Marker是否是专有的？可不可以直接使用DNA电泳的呢？
3、电泳之后很多人说会出现三条带。是三条带一起出现吗？有没有亮度的区别呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
世界上最浪漫的事情：执子之手，与子偕老。
1楼 2012-08-10 08:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-10 13:49:38
我提的是总RNA
第一个问题：我用的就是1%~1.5%的琼脂糖凝胶
第二个问题：我用的loading buffer 是通用的，Marker是用的DNAmaker2000
第三个问题：的确是三条带，理论上说是28s与18s比较亮，5s较淡时就是比较好的，如果5s很亮的话说明RNA降解了
赞一下(1人) 回复此楼
我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
2楼2012-08-10 09:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
vivian26: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-12 00:00:18
主要看你的目的是什么。（以下内容仅限于普通的rt-pcr及qPCR）
1：电泳，用琼脂糖就行，1%即可，至于变性，如果质量要求高的话可以试试，但比较麻烦。
2：loadingbuffer可以用DNA电泳的，但若使用marker的话，有RNA电泳专用的，DNA marker毕竟和RNA结构不一样。也有说28S rRNA在2000bp的上方，不知道准不准。不用marker也行，毕竟你不需要知道大小，只要提出出总RNA，质量没问题就行。
3：理论上时三条带，28S是18S的2倍，质量好的话5S看不到，一般都会有点降解，所以都会看见5S。
PS：质量和浓度还可以通过紫外分光光度计测量A230，A260，A280看比值
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-10 20:47:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangby2002

银虫 (小有名气)
回答以上问题：
1：可以用琼脂糖电泳（1-2%），主要是检测提起RNA的量，看看有否降解，假如后续要做RT-PCR，还需要进行RNA处理，取出DNA污染。
2：一般跑RNA电泳时最好换新鲜的电泳液，电泳槽最好清洗一下，DNAMarker2000就够了，主要检测3条带。
3：电泳后出现3条带，说明提取的RNA质量高，28S:18S=2:1
赞一下 回复此楼
业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
4楼2012-08-10 21:13:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivian26

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-10 20:47:36
主要看你的目的是什么。（以下内容仅限于普通的rt-pcr及qPCR）
1：电泳，用琼脂糖就行，1%即可，至于变性，如果质量要求高的话可以试试，但比较麻烦。
2：loadingbuffer可以用DNA电泳的，但若使用marker的话，有R ...

那么像是这样的电泳图，5S\18S\28S分别是指哪些条带呢？请帮我分析一下。这个的话就是用的DNA的loading buffer与Marker。最左和最右的两孔分别是Marker。
赞一下 回复此楼
世界上最浪漫的事情：执子之手，与子偕老。
5楼2012-08-11 10:11:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiaoxianying

银虫 (初入文坛)
回答：1.用百分之一的琼脂糖凝胶就可以，但要DEPC过夜处理的1*TAE，并高压灭菌
        2.buffer和DL2000是通用的，但使用前也要DEPC处理
        3.如果提取成功的话是有三条带
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-11 23:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiaoxianying

银虫 (初入文坛)
这是RNA吗，右边三条有基因组污染，杂质太多，建议你重新提取，你把具体步骤说一下，我帮你看看
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-11 23:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivian26

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qiaoxianying at 2012-08-11 23:19:03
这是RNA吗，右边三条有基因组污染，杂质太多，建议你重新提取，你把具体步骤说一下，我帮你看看

提取过程如下所示：
1、trizol处理5min。加入1/5体积氯仿，剧烈震摇30s。4度12000rpm离心10min。
2、取最上层到新的EP管内，加入等体积氯仿。4度12000rpm离心10min。
3、取上清到新的EP管中，加入等体积异丙醇，-20度沉淀约8h。4度12000rpm离心10min。
4、弃上清。加入与trizol等体积的75%冰乙醇。4度7500rpm离心5min。
5、弃上清，室温挥干乙醇。加入一定量的DEPC水溶解。
赞一下 回复此楼
世界上最浪漫的事情：执子之手，与子偕老。
8楼2012-08-11 23:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivian26

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qiaoxianying at 2012-08-11 23:19:03
这是RNA吗，右边三条有基因组污染，杂质太多，建议你重新提取，你把具体步骤说一下，我帮你看看

是中间那些相对暗的条带就是污染的吗？最上面和最下面的很亮的条带又是什么呢？
赞一下 回复此楼
世界上最浪漫的事情：执子之手，与子偕老。
9楼2012-08-11 23:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivian26

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qiaoxianying at 2012-08-11 23:13:21
回答：1.用百分之一的琼脂糖凝胶就可以，但要DEPC过夜处理的1*TAE，并高压灭菌
        2.buffer和DL2000是通用的，但使用前也要DEPC处理
        3.如果提取成功的话是有三条带

也就是说1*TAE和buffer的要求更高，与DNA电泳相比，是吗？如果降解的话会有什么现象呢？是拖尾吗？
赞一下 回复此楼
世界上最浪漫的事情：执子之手，与子偕老。
10楼2012-08-11 23:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 vivian26 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭