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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA电泳的一些疑惑
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qiaoxianying

银虫 (初入文坛)
提取步骤第二步可以不用，刚发过来的图右边三条带下面是5s，上面是基因组条带，说明你RNA里有DNA污染，可以适当加大trizol用量，第一步处理时间延长到10min
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11楼2012-08-12 00:47:02
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gl185

铜虫 (正式写手)
没有必要用甲醛变性胶，直接普通的电泳就可以，
loading buffer就用普通的，当然最好是新的
RNA的三条带，分别是28S,18S,5S，
他们的亮度分别是28S最亮，18S其次，5S应该是最暗的。
最佳的亮度是28S是18S亮度的两倍左右。
如果用试剂盒提的话，有时候5S条带是没有的。
电泳时间 120V 15-18min即可。
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12楼2012-08-14 12:53:20
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多面怪客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-10 20:47:36
主要看你的目的是什么。（以下内容仅限于普通的rt-pcr及qPCR）
1：电泳，用琼脂糖就行，1%即可，至于变性，如果质量要求高的话可以试试，但比较麻烦。
2：loadingbuffer可以用DNA电泳的，但若使用marker的话，有R ...

你好，我刚开始做生物实验。看到你的评论。我最近也提取了总RNA，但是我怀疑我的RNA是不是在提取过程中降解了。有几个问题想请教你。你意思是说用跑普通DNA的胶就可以跑RNA吗？如果提取质量较好，会是两个两带吗？如果用紫外分光光度计怎么评判质量？谢谢了，如果能回答我的这些疑问，万分感谢！
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13楼2014-10-29 01:09:35
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多面怪客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qiaoxianying at 2012-08-11 23:13:21
回答：1.用百分之一的琼脂糖凝胶就可以，但要DEPC过夜处理的1*TAE，并高压灭菌
        2.buffer和DL2000是通用的，但使用前也要DEPC处理
        3.如果提取成功的话是有三条带

你好，DEPC过夜处理的1*TAE的意思是说TAE要用DEPC水配吗
？
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14楼2014-10-29 01:10:48
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霍烨zz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 多面怪客 at 2014-10-29 01:09:35
你好，我刚开始做生物实验。看到你的评论。我最近也提取了总RNA，但是我怀疑我的RNA是不是在提取过程中降解了。有几个问题想请教你。你意思是说用跑普通DNA的胶就可以跑RNA吗？如果提取质量较好，会是两个两带吗？ ...

刚好我也在做，知道一点，就我所知给你说一下吧。
核酸在波长260nm处有最高吸收峰，而蛋白的最高吸收峰在280nm波长处。
RNA的A260/280的比值为1.8~2.0，认为蛋白或其他有机物的污染是可以容忍的。
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15楼2014-11-20 10:37:03
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