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qiaoxianying

银虫 (初入文坛)

提取步骤第二步可以不用,刚发过来的图右边三条带下面是5s,上面是基因组条带,说明你RNA里有DNA污染,可以适当加大trizol用量,第一步处理时间延长到10min
11楼2012-08-12 00:47:02
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gl185

铜虫 (正式写手)

没有必要用甲醛变性胶,直接普通的电泳就可以,
loading buffer就用普通的,当然最好是新的
RNA的三条带,分别是28S,18S,5S,
他们的亮度分别是28S最亮,18S其次,5S应该是最暗的。
最佳的亮度是28S是18S亮度的两倍左右。
如果用试剂盒提的话,有时候5S条带是没有的。
电泳时间 120V 15-18min即可。
12楼2012-08-14 12:53:20
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多面怪客

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-10 20:47:36
主要看你的目的是什么。(以下内容仅限于普通的rt-pcr及qPCR)
1:电泳,用琼脂糖就行,1%即可,至于变性,如果质量要求高的话可以试试,但比较麻烦。
2:loadingbuffer可以用DNA电泳的,但若使用marker的话,有R ...

你好,我刚开始做生物实验。看到你的评论。我最近也提取了总RNA,但是我怀疑我的RNA是不是在提取过程中降解了。有几个问题想请教你。你意思是说用跑普通DNA的胶就可以跑RNA吗?如果提取质量较好,会是两个两带吗?如果用紫外分光光度计怎么评判质量?谢谢了,如果能回答我的这些疑问,万分感谢!
13楼2014-10-29 01:09:35
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多面怪客

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by qiaoxianying at 2012-08-11 23:13:21
回答:1.用百分之一的琼脂糖凝胶就可以,但要DEPC过夜处理的1*TAE,并高压灭菌
        2.buffer和DL2000是通用的,但使用前也要DEPC处理
        3.如果提取成功的话是有三条带

你好,DEPC过夜处理的1*TAE的意思是说TAE要用DEPC水配吗
14楼2014-10-29 01:10:48
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霍烨zz

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 多面怪客 at 2014-10-29 01:09:35
你好,我刚开始做生物实验。看到你的评论。我最近也提取了总RNA,但是我怀疑我的RNA是不是在提取过程中降解了。有几个问题想请教你。你意思是说用跑普通DNA的胶就可以跑RNA吗?如果提取质量较好,会是两个两带吗? ...

刚好我也在做,知道一点,就我所知给你说一下吧。
核酸在波长260nm处有最高吸收峰,而蛋白的最高吸收峰在280nm波长处。
RNA的A260/280的比值为1.8~2.0,认为蛋白或其他有机物的污染是可以容忍的。
15楼2014-11-20 10:37:03
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