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[交流]
总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
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提取总dna后直接电泳有条带（如图），但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数：50ul体系，buffer（5ul），Mg2+（2ul），DMSO（2.5ul），2.5mM dNTP（4ul），20uM ITS1-F（4ul），20uM ITS4-R（4ul），总dna（1ul），taq酶（1ul），水（26.5） pcr后电泳图  总DNA直接电泳图 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mengfei8336: 金币+10, 谢谢关注。 2012-07-16 20:15:30
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-16 20:16:01
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mengfei8336: 金币+10, 谢谢关注。 2012-07-16 20:15:30
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-16 20:16:01
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补充一下： 一般PCR没有目标条带的时候，可能有下列原因： 1.模板:含有抑制物，含量低 2.Buffer对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短 对策: 1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物 4.降低退火温度、延长延伸时间 |
11楼2012-07-16 14:21:37
2楼2012-07-15 19:36:50
3楼2012-07-15 20:52:02
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tsuei428(金币+2): 谢谢参与
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
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本帖内容被屏蔽 |
5楼2012-07-15 23:29:55
6楼2012-07-16 08:34:33
7楼2012-07-16 08:45:44
8楼2012-07-16 08:49:55
9楼2012-07-16 12:14:52
10楼2012-07-16 14:15:06
12楼2012-07-17 08:27:51
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2012-07-15 21:55
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