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tsuei428

银虫 (小有名气)


[交流] 总dna电泳有条带,但PCR后只有引物二聚体

提取总dna后直接电泳有条带(如图),但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数:50ul体系,buffer(5ul),Mg2+(2ul),DMSO(2.5ul),2.5mM dNTP(4ul),20uM ITS1-F(4ul),20uM ITS4-R(4ul),总dna(1ul),taq酶(1ul),水(26.5)

pcr后电泳图



总DNA直接电泳图
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tsuei428

银虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-16 14:15:06
个人意见:你的模版量太大了,一般提得总DNA都要稀释50倍后再用。另外至右引物二聚体,没有杂带,这是明显的退火温度高了的问题,所以建议降低退火温度。如果有条件做touch down PCR最好了,一般的都是一次就出来。

谢谢,那引物的量是不是加多了呢?我看有些人做的好像引物和摸板的量都加2ul

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
13楼2012-07-17 08:29:58
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)



tsuei428(金币+2): 谢谢参与
两者之间有什么关系啊?只能说明你没P出来而已,引物确定没问题就提高退火温度。
2楼2012-07-15 19:36:50
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j2

木虫 (正式写手)



tsuei428(金币+2): 谢谢参与
降低退火温度吧。。。
不加二甲亚砜试过没有,有结果不?或者降低一点二甲亚砜的浓度。二甲亚砜对酶活性有影响的。
3楼2012-07-15 20:52:02
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)


tsuei428(金币+2): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

5楼2012-07-15 23:29:55
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