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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
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tsuei428

银虫 (小有名气)

[交流] 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体

提取总dna后直接电泳有条带（如图），但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数：50ul体系，buffer（5ul），Mg2+（2ul），DMSO（2.5ul），2.5mM dNTP（4ul），20uM ITS1-F（4ul），20uM ITS4-R（4ul），总dna（1ul），taq酶（1ul），水（26.5）

pcr后电泳图



总DNA直接电泳图
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1楼 2012-07-15 14:15:51
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tsuei428

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 08:49:55
亲，你是不是模板加的太多了，需要对你的模板进行稀释的，看你那DNA的话，怎么着也得稀释50-100倍，然后就是需要降低退火温度，不是提高，多试试，肯定是你的PCR出了问题

退火温度53，55都试过，都没跑出来。摸板量太大吗？我一直以为是摸板浓度低了，才加了1ul。3q~还有，引物二聚体那么多是不是得降低引物浓度呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2012-07-17 08:27:51
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
两者之间有什么关系啊？只能说明你没P出来而已，引物确定没问题就提高退火温度。
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2楼2012-07-15 19:36:50
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j2

木虫 (正式写手)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
降低退火温度吧。。。
不加二甲亚砜试过没有，有结果不？或者降低一点二甲亚砜的浓度。二甲亚砜对酶活性有影响的。
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3楼2012-07-15 20:52:02
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-15 23:29:55
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