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tsuei428

银虫 (小有名气)


[交流] 总dna电泳有条带,但PCR后只有引物二聚体

提取总dna后直接电泳有条带(如图),但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数:50ul体系,buffer(5ul),Mg2+(2ul),DMSO(2.5ul),2.5mM dNTP(4ul),20uM ITS1-F(4ul),20uM ITS4-R(4ul),总dna(1ul),taq酶(1ul),水(26.5)

pcr后电泳图



总DNA直接电泳图
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tsuei428

银虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 08:49:55
亲,你是不是模板加的太多了,需要对你的模板进行稀释的,看你那DNA的话,怎么着也得稀释50-100倍,然后就是需要降低退火温度,不是提高,多试试,肯定是你的PCR出了问题

退火温度53,55都试过,都没跑出来。摸板量太大吗?我一直以为是摸板浓度低了,才加了1ul。3q~还有,引物二聚体那么多是不是得降低引物浓度呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2012-07-17 08:27:51
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)



tsuei428(金币+2): 谢谢参与
两者之间有什么关系啊?只能说明你没P出来而已,引物确定没问题就提高退火温度。
2楼2012-07-15 19:36:50
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j2

木虫 (正式写手)



tsuei428(金币+2): 谢谢参与
降低退火温度吧。。。
不加二甲亚砜试过没有,有结果不?或者降低一点二甲亚砜的浓度。二甲亚砜对酶活性有影响的。
3楼2012-07-15 20:52:02
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)


tsuei428(金币+2): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

5楼2012-07-15 23:29:55
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