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tsuei428

银虫 (小有名气)

[交流] 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体

提取总dna后直接电泳有条带（如图），但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数：50ul体系，buffer（5ul），Mg2+（2ul），DMSO（2.5ul），2.5mM dNTP（4ul），20uM ITS1-F（4ul），20uM ITS4-R（4ul），总dna（1ul），taq酶（1ul），水（26.5）

pcr后电泳图



总DNA直接电泳图
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1楼 2012-07-15 14:15:51
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jl860822

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 这位虫虫，是淘宝客啊，鼓励交流 2012-07-16 13:52:49
亲，你是不是模板加的太多了，需要对你的模板进行稀释的，看你那DNA的话，怎么着也得稀释50-100倍，然后就是需要降低退火温度，不是提高，多试试，肯定是你的PCR出了问题
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8楼2012-07-16 08:49:55
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jl860822

金虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by tsuei428 at 2012-07-17 08:27:51
退火温度53，55都试过，都没跑出来。摸板量太大吗？我一直以为是摸板浓度低了，才加了1ul。3q~还有，引物二聚体那么多是不是得降低引物浓度呢？
...

建议做个梯度得了，应该可以做出来的
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16楼2012-07-17 08:45:01
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jl860822

金虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by tsuei428 at 2012-07-17 08:46:38
弱弱地问下，摸板稀释50倍的话是用TEbuffer溶解稀释吗？
...

不用，用灭菌水稀释，TE中的EDTA会对酶活有抑制作用的
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18楼2012-07-17 09:52:31
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