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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
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tsuei428

银虫 (小有名气)

[交流] 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体

提取总dna后直接电泳有条带（如图），但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数：50ul体系，buffer（5ul），Mg2+（2ul），DMSO（2.5ul），2.5mM dNTP（4ul），20uM ITS1-F（4ul），20uM ITS4-R（4ul），总dna（1ul），taq酶（1ul），水（26.5）

pcr后电泳图



总DNA直接电泳图
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1楼 2012-07-15 14:15:51
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tsuei428

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-17 08:43:33
这个其实需要你自己去实验，因为引物大家配的浓度也不同。不过2uL和4uL我觉得应该不会有很大的差别。当然，你也可以适当减少再PCR试试看。...

PCR条件：
94℃    3min
94℃    30s
53℃    30s
72℃    1min  
30circle
72   10min
这样设计有问题吗
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19楼2012-07-17 09:59:49
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
两者之间有什么关系啊？只能说明你没P出来而已，引物确定没问题就提高退火温度。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-15 19:36:50
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j2

木虫 (正式写手)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
降低退火温度吧。。。
不加二甲亚砜试过没有，有结果不？或者降低一点二甲亚砜的浓度。二甲亚砜对酶活性有影响的。
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3楼2012-07-15 20:52:02
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-15 23:29:55
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