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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
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tsuei428

银虫 (小有名气)

[交流] 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体

提取总dna后直接电泳有条带（如图），但PCR后电泳却只有引物二聚体。请教各位是何缘故。PCR参数：50ul体系，buffer（5ul），Mg2+（2ul），DMSO（2.5ul），2.5mM dNTP（4ul），20uM ITS1-F（4ul），20uM ITS4-R（4ul），总dna（1ul），taq酶（1ul），水（26.5）

pcr后电泳图



总DNA直接电泳图
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1楼 2012-07-15 14:15:51
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reallpf

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人意见：你的模版量太大了，一般提得总DNA都要稀释50倍后再用。另外至右引物二聚体，没有杂带，这是明显的退火温度高了的问题，所以建议降低退火温度。如果有条件做touch down PCR最好了，一般的都是一次就出来。
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10楼2012-07-16 14:15:06
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
两者之间有什么关系啊？只能说明你没P出来而已，引物确定没问题就提高退火温度。
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2楼2012-07-15 19:36:50
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j2

木虫 (正式写手)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
降低退火温度吧。。。
不加二甲亚砜试过没有，有结果不？或者降低一点二甲亚砜的浓度。二甲亚砜对酶活性有影响的。
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3楼2012-07-15 20:52:02
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
★
tsuei428(金币+2): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-15 23:29:55
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