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菌液PCR问题 已有10人参与
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| 我做菌液PCR，同学说出来的都是引物二聚体，这是怎么回事呢？ |
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4楼2012-05-09 16:23:06
xzx018
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 15647.7
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- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2012-05-09 15:06:12
超然渡陈
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 4
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- 虫号: 1110016
- 注册: 2010-09-28
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-09 19:11:47
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-09 19:11:47
| 楼主应该是用菌液PCR做快速鉴定转化后的阳性克隆吧？所用的引物是你之前克隆基因的引物，还是载体上的通用引物？要把具体情况说清楚而且最好要带图的。假如用的是克隆基因时的引物，做菌落PCR或者菌液PCR没有目的条带而出现引物二聚体可以大概说明是假阳性。要是用的通用引物或者其它新的引物，可能是你退火温度没选好或者其它一些原因，但是不能肯定是假阳性。另外需要说明的是做酵母菌落或者菌液PCR要提前煮沸，因为酵母有细胞壁，预变性和变性不能使壁完全破碎，而一般的细菌就不用预先煮沸。 |
5楼2012-05-09 17:10:37
6楼2012-05-10 15:59:54