应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1419  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hucuiyao

新虫 (小有名气)

[交流] 菌液PCR问题 已有10人参与

我做菌液PCR，同学说出来的都是引物二聚体，这是怎么回事呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
yichongweiban
1楼 2012-05-09 15:02:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

137167741

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-09 19:11:41
要说明你为什么做菌液PCR，如果单纯是细菌基因组有该基因，即存在模板，PCR出来都是引物二具体，说明有可能引物不行，有可能是PCR操作有问题；若是连接载体，转化感受态细胞，检验是否有目的基因，可能是由于你转化失败，质粒没有转进去。
赞一下(1人) 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
4楼2012-05-09 16:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
上图啊，引物二聚体都在最下面，我的都在100bp以下，在做菌液pcr时先把菌煮沸5min左右，使细胞裂解，当然也有人说预变性时也可以达到这个目的
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-09 15:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ysy000000

木虫 (正式写手)
无图无真相哦
回复此楼
劳其筋骨，饿其体肤。
3楼2012-05-09 15:21:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超然渡陈

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-09 19:11:47
楼主应该是用菌液PCR做快速鉴定转化后的阳性克隆吧？所用的引物是你之前克隆基因的引物，还是载体上的通用引物？要把具体情况说清楚而且最好要带图的。假如用的是克隆基因时的引物，做菌落PCR或者菌液PCR没有目的条带而出现引物二聚体可以大概说明是假阳性。要是用的通用引物或者其它新的引物，可能是你退火温度没选好或者其它一些原因，但是不能肯定是假阳性。另外需要说明的是做酵母菌落或者菌液PCR要提前煮沸，因为酵母有细胞壁，预变性和变性不能使壁完全破碎，而一般的细菌就不用预先煮沸。
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-09 17:10:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hucuiyao

新虫 (小有名气)
我做菌液PCR是要鉴定转化后的阳性克隆，用的是通用引物，是转化大肠杆菌的，94度预变性4分钟，94度45秒，50度45秒，72度1分30秒，31个偱环，长度大约是1200bp的。这个程序大家认为合适吗？这个预变性时间是不是短了点？退火温度不知道是不是也低呢？请各位虫友帮忙分析下，图片当时看的没目的条带，所以也没保存，初做没经验，不好意思噢
赞一下 回复此楼
yichongweiban
6楼2012-05-10 15:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一氧化氮

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
预变性温度可调至97-96度，退火温度适当升高，57-60度尝试一下
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-10 21:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangly

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
拿菌液做模板之前，先吸到PCR管20微升里用PCR仪煮一下， 95度15min即可，煮过的菌液用做模板。
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-11 08:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
9楼2012-05-11 09:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoli8609

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:39:01
菌液PCR采用的条件应该和你当初克隆这个目的片段的条件是一样的，如果没有目的片段，可以适当降低退火温度再试试，如果不行就凶多吉少了，另外，建议你做的时候加上阳性对照，检测是不是菌液模板有问题，祝好运！
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-11 09:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hucuiyao 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +7 秋二十二 2026-03-30 7/350 2026-03-31 10:51 by Jaylen.
[考研] 284求调剂 +5 小熊～～ 2026-03-31 5/250 2026-03-31 10:22 by sophie2180
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 083000学硕274求调剂 +12 Li李鱼 2026-03-26 12/600 2026-03-31 10:01 by cal0306
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
[考研] 材料科学与工程求调剂 +10 深V宿舍吧 2026-03-29 10/500 2026-03-31 04:08 by fmesaito
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 085701环境工程求调剂 +11 多久上课 2026-03-27 12/600 2026-03-30 21:21 by 研究僧导导
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +6 @taotao 2026-03-26 7/350 2026-03-30 10:43 by 我是小康
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭