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暮寒

金虫 (正式写手)


[交流] 求教!!PAGE胶出现的诡异结果,加急!!

这两天的实验中遇到了一个非常诡异的问题,想问问大家,有没有遇到过类似的情况~~~

非变性聚丙烯凝胶电泳跑出来,胶上的marker是正常的,但所有的DNA样一点点都没有往下走,全部在点样口处,能看得出基本都有产物,就是不往下面走,可是marker又是正常的梯度,一个条带不少,这到底是肿么回事??

如果是断路了,那么marker应该也不动,可就是marker正常!!!
这几天就为找原因搞得头都大了,能换的试剂和溶液基本都换了一遍,引物也是新的,实在想不出招了

有做过这类实验的同仁们,请赐教!!!
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暮寒(金币+1): 谢谢参与
建议你去专业版发帖询问一下~~
2楼2012-05-06 21:28:50
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lppv

荣誉版主 (文坛精英)


★ ★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+1, 过来我教你 2012-05-07 08:31:18
这个真不懂,胶啊 电泳啊。,。。没做过
3楼2012-05-06 21:31:00
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
bless
4楼2012-05-06 21:48:46
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brown437

新虫 (初入文坛)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能的原因是胶的孔径过小,不知道你的样品是纯DNA 又或者是DNA-protein的complex,如果你的样品的size较大,可能不能通过孔径,所以都留在了well里。
5楼2012-05-06 21:54:34
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暮寒(金币+1): 谢谢参与
去专业版发帖询问
6楼2012-05-06 22:46:48
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waterbeetle

木虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
可以先跑一下琼脂糖,如果可以可能是page的孔径小,你的产物较大
7楼2012-05-07 08:19:03
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暮寒(金币+1): 谢谢参与
先用琼脂糖凝胶检测一下,看看能不能跑下去,page对缓冲液要求比较高

初步怀疑是你的样品或loading buffer 盐离子浓度高了
8楼2012-05-07 08:33:10
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zoelxx

铁杆木虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
是不是胶浓度太高,样品跑不进去?
9楼2012-05-07 08:38:17
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yangy1220

新虫 (职业作家)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
11楼2012-05-07 08:55:22
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neu234

木虫之王 (文学泰斗)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
不懂,帮顶一个
15楼2012-05-07 09:35:47
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
会不会是loading buffer的问题呢
16楼2012-05-07 09:47:05
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wuweibewin

金虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
加样孔比较亮一般5个原因,有DNA片段太大、或者蛋白质杂质还有一种比较少的可能DNA浓度太高(上样量太大)、凝胶浓度太高、或者凝胶制作时未完全融化在加样孔处阻滞了部分样品。
聚丙烯酰胺凝胶浓度太大,DNA分子量大,进不去凝胶---跑个琼脂糖试一试就可以;DNA样品本身就有问题,可能就没有DNA存在,只是一些杂质蛋白--通过紫外分光检测可以排除!DNA浓度过高,一般DNA溶液会很粘稠不容易吸取,在样品加样时就能发现;凝胶浓度高,试一试琼脂糖凝胶0.8%基本可以解决问题;凝胶制作问题,那你就自己反省吧!
以上所有情况本人都切身遇到过!
如果都不是,那你就想上帝祷告吧!

[ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ]
17楼2012-05-07 11:24:02
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abczhang

至尊木虫 (文坛精英)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
budong
18楼2012-05-07 11:54:51
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匿名

用户注销 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
20楼2012-05-07 15:48:41
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clarktao

木虫之王 (文学泰斗)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
胶浓度太高
21楼2012-05-07 15:54:02
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shuguang12

金虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能是DNA样品问题,我跑琼脂糖凝胶也遇到过
22楼2012-05-07 15:55:32
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youngker918

金虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
第一,可能是是你做的蛋白的分子太大,而跑不下去,把胶的浓度调稀;
第二,可能是样品中有比较多的离心渣堵塞胶孔,所以楼主可能要多离几次心;
第三,最悲催的是楼主研究的蛋白的等电点高于电泳缓冲液的pH,所以解决办法是要做酸性电泳了,关于酸性电泳具体的我没有做过,只是听过。
23楼2012-05-07 18:54:35
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dshlove

木虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
用琼脂糖凝胶跑一下试试,看看能不能跑出条带。不知道你要跑的样品多大啊!
24楼2012-05-08 08:57:11
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zhen_fang

银虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
25楼2012-05-08 09:35:44
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lvtd

金虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
估计是loading buffer 出了问题,你换个试试,Maker不用和buffer混合所以跑下去了。
26楼2012-05-08 09:44:38
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
DNA样与一些蛋白质结合就会分子量加大,跑不下去。lz做的到底是非变性蛋白还是非变性DNA?注意你的胶浓度,与需要分离的DNA样品的分子量。一般情况下DNA样品需要除蛋白。
29楼2012-05-08 11:22:50
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广东TOWN

银虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
经验浅,不清楚!
30楼2012-05-08 13:25:12
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ww-129656

金虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
不知道你跑多大浓度的PAGE,我们一般用8%的,只有分离有两三个碱基差别的DNA的时候才跑PAGE,我怀疑是你的DNA太大了,所以跑不下去。
31楼2012-05-08 14:28:10
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a且歌且行a

金虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
胶浓度大了吧!
32楼2012-05-20 16:09:35
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yuyitt

新虫 (初入文坛)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
楼主解决问题了么?我最近也也到了一样恶心的事情,我的marker都跑的很好,但是pcr产物却非常乱,拖尾很严重。
33楼2012-05-28 21:33:03
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yuyitt

新虫 (初入文坛)


我也遇到了同样的问题,如我的楼。。。。
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4565892
34楼2012-05-30 21:21:25
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zlee2130

金虫 (小有名气)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
非变性胶可以不加浓缩胶,只用分离胶试试
35楼2012-06-01 15:01:15
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paul-zfy

新虫 (初入文坛)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
最近几天也在这个,maker正常说明,电泳中的制胶,跑胶,染色脱色这些没问题,这可能是样品的问题把,试试几种浓度,上样buffer呢
36楼2012-07-26 19:48:32
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亘久奕皓

新虫 (初入文坛)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
我也出现过这样的情况
37楼2014-06-24 11:16:43
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简单回复
zhang731110楼
2012-05-07 08:49   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福
nanmann12楼
2012-05-07 09:10   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
2012-05-07 09:22   回复  
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xiejf14楼
2012-05-07 09:33   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
2012-05-07 13:23   回复  
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祝福
heibi27楼
2012-05-08 09:48   回复  
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herome28楼
2012-05-08 09:59   回复  
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