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暮寒

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1516.6
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虫号: 740825

[交流] 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！

这两天的实验中遇到了一个非常诡异的问题，想问问大家，有没有遇到过类似的情况~~~

非变性聚丙烯凝胶电泳跑出来，胶上的marker是正常的，但所有的DNA样一点点都没有往下走，全部在点样口处，能看得出基本都有产物，就是不往下面走，可是marker又是正常的梯度，一个条带不少，这到底是肿么回事？？

如果是断路了，那么marker应该也不动，可就是marker正常！！！
这几天就为找原因搞得头都大了，能换的试剂和溶液基本都换了一遍，引物也是新的，实在想不出招了

有做过这类实验的同仁们，请赐教！！！

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yuluoqiutong

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1楼 2012-05-06 20:51:25

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wuweibewin

金虫 (正式写手)

BioEPI: 1
应助: 8 (幼儿园)
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虫号: 738179

★
暮寒(金币+1): 谢谢参与

加样孔比较亮一般5个原因，有DNA片段太大、或者蛋白质杂质还有一种比较少的可能DNA浓度太高（上样量太大）、凝胶浓度太高、或者凝胶制作时未完全融化在加样孔处阻滞了部分样品。
聚丙烯酰胺凝胶浓度太大，DNA分子量大，进不去凝胶---跑个琼脂糖试一试就可以；DNA样品本身就有问题，可能就没有DNA存在，只是一些杂质蛋白--通过紫外分光检测可以排除！DNA浓度过高，一般DNA溶液会很粘稠不容易吸取，在样品加样时就能发现；凝胶浓度高，试一试琼脂糖凝胶0.8%基本可以解决问题；凝胶制作问题，那你就自己反省吧！
以上所有情况本人都切身遇到过！
如果都不是，那你就想上帝祷告吧！

[ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ]