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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！
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暮寒

金虫 (正式写手)

[交流] 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！

这两天的实验中遇到了一个非常诡异的问题，想问问大家，有没有遇到过类似的情况~~~

非变性聚丙烯凝胶电泳跑出来，胶上的marker是正常的，但所有的DNA样一点点都没有往下走，全部在点样口处，能看得出基本都有产物，就是不往下面走，可是marker又是正常的梯度，一个条带不少，这到底是肿么回事？？

如果是断路了，那么marker应该也不动，可就是marker正常！！！
这几天就为找原因搞得头都大了，能换的试剂和溶液基本都换了一遍，引物也是新的，实在想不出招了

有做过这类实验的同仁们，请赐教！！！
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1楼 2012-05-06 20:51:25
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wuweibewin

金虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
加样孔比较亮一般5个原因，有DNA片段太大、或者蛋白质杂质还有一种比较少的可能DNA浓度太高（上样量太大）、凝胶浓度太高、或者凝胶制作时未完全融化在加样孔处阻滞了部分样品。
聚丙烯酰胺凝胶浓度太大，DNA分子量大，进不去凝胶---跑个琼脂糖试一试就可以；DNA样品本身就有问题，可能就没有DNA存在，只是一些杂质蛋白--通过紫外分光检测可以排除！DNA浓度过高，一般DNA溶液会很粘稠不容易吸取，在样品加样时就能发现；凝胶浓度高，试一试琼脂糖凝胶0.8%基本可以解决问题；凝胶制作问题，那你就自己反省吧！
以上所有情况本人都切身遇到过！
如果都不是，那你就想上帝祷告吧！

[ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ]
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17楼2012-05-07 11:24:02
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对吻鱼

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
建议你去专业版发帖询问一下~~
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2楼2012-05-06 21:28:50
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lppv

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+1, 过来我教你 2012-05-07 08:31:18
这个真不懂，胶啊 电泳啊。，。。没做过
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3楼2012-05-06 21:31:00
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brown437

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能的原因是胶的孔径过小，不知道你的样品是纯DNA 又或者是DNA-protein的complex，如果你的样品的size较大，可能不能通过孔径，所以都留在了well里。
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5楼2012-05-06 21:54:34
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