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暮寒

金虫 (正式写手)


[交流] 求教!!PAGE胶出现的诡异结果,加急!!

这两天的实验中遇到了一个非常诡异的问题,想问问大家,有没有遇到过类似的情况~~~

非变性聚丙烯凝胶电泳跑出来,胶上的marker是正常的,但所有的DNA样一点点都没有往下走,全部在点样口处,能看得出基本都有产物,就是不往下面走,可是marker又是正常的梯度,一个条带不少,这到底是肿么回事??

如果是断路了,那么marker应该也不动,可就是marker正常!!!
这几天就为找原因搞得头都大了,能换的试剂和溶液基本都换了一遍,引物也是新的,实在想不出招了

有做过这类实验的同仁们,请赐教!!!
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wuweibewin

金虫 (正式写手)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
加样孔比较亮一般5个原因,有DNA片段太大、或者蛋白质杂质还有一种比较少的可能DNA浓度太高(上样量太大)、凝胶浓度太高、或者凝胶制作时未完全融化在加样孔处阻滞了部分样品。
聚丙烯酰胺凝胶浓度太大,DNA分子量大,进不去凝胶---跑个琼脂糖试一试就可以;DNA样品本身就有问题,可能就没有DNA存在,只是一些杂质蛋白--通过紫外分光检测可以排除!DNA浓度过高,一般DNA溶液会很粘稠不容易吸取,在样品加样时就能发现;凝胶浓度高,试一试琼脂糖凝胶0.8%基本可以解决问题;凝胶制作问题,那你就自己反省吧!
以上所有情况本人都切身遇到过!
如果都不是,那你就想上帝祷告吧!

[ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ]
17楼2012-05-07 11:24:02
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查看全部 37 个回答

暮寒(金币+1): 谢谢参与
建议你去专业版发帖询问一下~~
2楼2012-05-06 21:28:50
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lppv

荣誉版主 (文坛精英)


★ ★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+1, 过来我教你 2012-05-07 08:31:18
这个真不懂,胶啊 电泳啊。,。。没做过
3楼2012-05-06 21:31:00
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brown437

新虫 (初入文坛)



暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能的原因是胶的孔径过小,不知道你的样品是纯DNA 又或者是DNA-protein的complex,如果你的样品的size较大,可能不能通过孔径,所以都留在了well里。
5楼2012-05-06 21:54:34
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