应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！
371/1返回列表
查看: 4325  |  回复: 36
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

暮寒

金虫 (正式写手)

[交流] 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！

这两天的实验中遇到了一个非常诡异的问题，想问问大家，有没有遇到过类似的情况~~~

非变性聚丙烯凝胶电泳跑出来，胶上的marker是正常的，但所有的DNA样一点点都没有往下走，全部在点样口处，能看得出基本都有产物，就是不往下面走，可是marker又是正常的梯度，一个条带不少，这到底是肿么回事？？

如果是断路了，那么marker应该也不动，可就是marker正常！！！
这几天就为找原因搞得头都大了，能换的试剂和溶液基本都换了一遍，引物也是新的，实在想不出招了

有做过这类实验的同仁们，请赐教！！！
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yuluoqiutong

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-05-06 20:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

paul-zfy

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
最近几天也在这个，maker正常说明，电泳中的制胶，跑胶，染色脱色这些没问题，这可能是样品的问题把，试试几种浓度，上样buffer呢
赞一下 回复此楼
36楼2012-07-26 19:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

对吻鱼

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
建议你去专业版发帖询问一下~~
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-06 21:28:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lppv

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+1, 过来我教你 2012-05-07 08:31:18
这个真不懂，胶啊 电泳啊。，。。没做过
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-06 21:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
bless
回复此楼
4楼2012-05-06 21:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brown437

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能的原因是胶的孔径过小，不知道你的样品是纯DNA 又或者是DNA-protein的complex，如果你的样品的size较大，可能不能通过孔径，所以都留在了well里。
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-06 21:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sesame_oil

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
去专业版发帖询问
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-06 22:46:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterbeetle

木虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可以先跑一下琼脂糖，如果可以可能是page的孔径小，你的产物较大
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-07 08:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
先用琼脂糖凝胶检测一下，看看能不能跑下去，page对缓冲液要求比较高

初步怀疑是你的样品或loading buffer 盐离子浓度高了
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-07 08:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoelxx

铁杆木虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
是不是胶浓度太高，样品跑不进去？
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-07 08:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangy1220

新虫 (职业作家)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
回复此楼
11楼2012-05-07 08:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neu234

木虫之王 (文学泰斗)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
不懂，帮顶一个
回复此楼
15楼2012-05-07 09:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuluoqiutong

木虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
会不会是loading buffer的问题呢
赞一下 回复此楼
16楼2012-05-07 09:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuweibewin

金虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
加样孔比较亮一般5个原因，有DNA片段太大、或者蛋白质杂质还有一种比较少的可能DNA浓度太高（上样量太大）、凝胶浓度太高、或者凝胶制作时未完全融化在加样孔处阻滞了部分样品。
聚丙烯酰胺凝胶浓度太大，DNA分子量大，进不去凝胶---跑个琼脂糖试一试就可以；DNA样品本身就有问题，可能就没有DNA存在，只是一些杂质蛋白--通过紫外分光检测可以排除！DNA浓度过高，一般DNA溶液会很粘稠不容易吸取，在样品加样时就能发现；凝胶浓度高，试一试琼脂糖凝胶0.8%基本可以解决问题；凝胶制作问题，那你就自己反省吧！
以上所有情况本人都切身遇到过！
如果都不是，那你就想上帝祷告吧！

[ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ]
赞一下 回复此楼
17楼2012-05-07 11:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

abczhang

至尊木虫 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
budong
回复此楼
18楼2012-05-07 11:54:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
赞一下
20楼2012-05-07 15:48:41
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

clarktao

木虫之王 (文学泰斗)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
胶浓度太高
回复此楼
21楼2012-05-07 15:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuguang12

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能是DNA样品问题，我跑琼脂糖凝胶也遇到过
赞一下 回复此楼
22楼2012-05-07 15:55:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngker918

金虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
第一，可能是是你做的蛋白的分子太大，而跑不下去，把胶的浓度调稀；
第二，可能是样品中有比较多的离心渣堵塞胶孔，所以楼主可能要多离几次心；
第三，最悲催的是楼主研究的蛋白的等电点高于电泳缓冲液的pH，所以解决办法是要做酸性电泳了，关于酸性电泳具体的我没有做过，只是听过。
赞一下 回复此楼
23楼2012-05-07 18:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
用琼脂糖凝胶跑一下试试，看看能不能跑出条带。不知道你要跑的样品多大啊！
赞一下 回复此楼
24楼2012-05-08 08:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhen_fang

银虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
回复此楼
25楼2012-05-08 09:35:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvtd

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
估计是loading buffer 出了问题，你换个试试，Maker不用和buffer混合所以跑下去了。
赞一下 回复此楼
26楼2012-05-08 09:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
DNA样与一些蛋白质结合就会分子量加大，跑不下去。lz做的到底是非变性蛋白还是非变性DNA？注意你的胶浓度，与需要分离的DNA样品的分子量。一般情况下DNA样品需要除蛋白。
赞一下 回复此楼
29楼2012-05-08 11:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

广东TOWN

银虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
经验浅，不清楚！
回复此楼
30楼2012-05-08 13:25:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ww-129656

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
不知道你跑多大浓度的PAGE，我们一般用8%的，只有分离有两三个碱基差别的DNA的时候才跑PAGE，我怀疑是你的DNA太大了，所以跑不下去。
赞一下 回复此楼
31楼2012-05-08 14:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a且歌且行a

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
胶浓度大了吧！
回复此楼
32楼2012-05-20 16:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyitt

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
楼主解决问题了么？我最近也也到了一样恶心的事情，我的marker都跑的很好，但是pcr产物却非常乱，拖尾很严重。
赞一下 回复此楼
33楼2012-05-28 21:33:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyitt

新虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的问题，如我的楼。。。。
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4565892
赞一下 回复此楼
34楼2012-05-30 21:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zlee2130

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
非变性胶可以不加浓缩胶，只用分离胶试试
赞一下 回复此楼
35楼2012-06-01 15:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亘久奕皓

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
我也出现过这样的情况
赞一下 回复此楼
37楼2014-06-24 11:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zhang731110楼
2012-05-07 08:49   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福
nanmann12楼
2012-05-07 09:10   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
秋之落叶13楼
2012-05-07 09:22   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
xiejf14楼
2012-05-07 09:33   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
dennis19872119楼
2012-05-07 13:23   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福
heibi27楼
2012-05-08 09:48   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
herome28楼
2012-05-08 09:59   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 暮寒 的主题更新
371/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭