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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！
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暮寒

金虫 (正式写手)

[交流] 求教！！PAGE胶出现的诡异结果，加急！！

这两天的实验中遇到了一个非常诡异的问题，想问问大家，有没有遇到过类似的情况~~~

非变性聚丙烯凝胶电泳跑出来，胶上的marker是正常的，但所有的DNA样一点点都没有往下走，全部在点样口处，能看得出基本都有产物，就是不往下面走，可是marker又是正常的梯度，一个条带不少，这到底是肿么回事？？

如果是断路了，那么marker应该也不动，可就是marker正常！！！
这几天就为找原因搞得头都大了，能换的试剂和溶液基本都换了一遍，引物也是新的，实在想不出招了

有做过这类实验的同仁们，请赐教！！！
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1楼 2012-05-06 20:51:25
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对吻鱼

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
建议你去专业版发帖询问一下~~
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2楼2012-05-06 21:28:50
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lppv

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+1, 过来我教你 2012-05-07 08:31:18
这个真不懂，胶啊 电泳啊。，。。没做过
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3楼2012-05-06 21:31:00
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
bless
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4楼2012-05-06 21:48:46
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brown437

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能的原因是胶的孔径过小，不知道你的样品是纯DNA 又或者是DNA-protein的complex，如果你的样品的size较大，可能不能通过孔径，所以都留在了well里。
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5楼2012-05-06 21:54:34
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sesame_oil

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
去专业版发帖询问
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6楼2012-05-06 22:46:48
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waterbeetle

木虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可以先跑一下琼脂糖，如果可以可能是page的孔径小，你的产物较大
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7楼2012-05-07 08:19:03
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
先用琼脂糖凝胶检测一下，看看能不能跑下去，page对缓冲液要求比较高

初步怀疑是你的样品或loading buffer 盐离子浓度高了
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8楼2012-05-07 08:33:10
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zoelxx

铁杆木虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
是不是胶浓度太高，样品跑不进去？
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9楼2012-05-07 08:38:17
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yangy1220

新虫 (职业作家)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
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11楼2012-05-07 08:55:22
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neu234

木虫之王 (文学泰斗)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
不懂，帮顶一个
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15楼2012-05-07 09:35:47
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
会不会是loading buffer的问题呢
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16楼2012-05-07 09:47:05
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wuweibewin

金虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
加样孔比较亮一般5个原因，有DNA片段太大、或者蛋白质杂质还有一种比较少的可能DNA浓度太高（上样量太大）、凝胶浓度太高、或者凝胶制作时未完全融化在加样孔处阻滞了部分样品。
聚丙烯酰胺凝胶浓度太大，DNA分子量大，进不去凝胶---跑个琼脂糖试一试就可以；DNA样品本身就有问题，可能就没有DNA存在，只是一些杂质蛋白--通过紫外分光检测可以排除！DNA浓度过高，一般DNA溶液会很粘稠不容易吸取，在样品加样时就能发现；凝胶浓度高，试一试琼脂糖凝胶0.8%基本可以解决问题；凝胶制作问题，那你就自己反省吧！
以上所有情况本人都切身遇到过！
如果都不是，那你就想上帝祷告吧！

[ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ]
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17楼2012-05-07 11:24:02
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abczhang

至尊木虫 (文坛精英)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
budong
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18楼2012-05-07 11:54:51
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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20楼2012-05-07 15:48:41
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clarktao

木虫之王 (文学泰斗)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
胶浓度太高
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21楼2012-05-07 15:54:02
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shuguang12

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
可能是DNA样品问题，我跑琼脂糖凝胶也遇到过
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22楼2012-05-07 15:55:32
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youngker918

金虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
第一，可能是是你做的蛋白的分子太大，而跑不下去，把胶的浓度调稀；
第二，可能是样品中有比较多的离心渣堵塞胶孔，所以楼主可能要多离几次心；
第三，最悲催的是楼主研究的蛋白的等电点高于电泳缓冲液的pH，所以解决办法是要做酸性电泳了，关于酸性电泳具体的我没有做过，只是听过。
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23楼2012-05-07 18:54:35
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
用琼脂糖凝胶跑一下试试，看看能不能跑出条带。不知道你要跑的样品多大啊！
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24楼2012-05-08 08:57:11
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zhen_fang

银虫 (正式写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
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25楼2012-05-08 09:35:44
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lvtd

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
估计是loading buffer 出了问题，你换个试试，Maker不用和buffer混合所以跑下去了。
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26楼2012-05-08 09:44:38
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
DNA样与一些蛋白质结合就会分子量加大，跑不下去。lz做的到底是非变性蛋白还是非变性DNA？注意你的胶浓度，与需要分离的DNA样品的分子量。一般情况下DNA样品需要除蛋白。
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29楼2012-05-08 11:22:50
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广东TOWN

银虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
经验浅，不清楚！
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30楼2012-05-08 13:25:12
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ww-129656

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
不知道你跑多大浓度的PAGE，我们一般用8%的，只有分离有两三个碱基差别的DNA的时候才跑PAGE，我怀疑是你的DNA太大了，所以跑不下去。
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31楼2012-05-08 14:28:10
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a且歌且行a

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
胶浓度大了吧！
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32楼2012-05-20 16:09:35
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yuyitt

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
楼主解决问题了么？我最近也也到了一样恶心的事情，我的marker都跑的很好，但是pcr产物却非常乱，拖尾很严重。
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33楼2012-05-28 21:33:03
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yuyitt

新虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的问题，如我的楼。。。。
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4565892
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34楼2012-05-30 21:21:25
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zlee2130

金虫 (小有名气)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
非变性胶可以不加浓缩胶，只用分离胶试试
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35楼2012-06-01 15:01:15
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paul-zfy

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
最近几天也在这个，maker正常说明，电泳中的制胶，跑胶，染色脱色这些没问题，这可能是样品的问题把，试试几种浓度，上样buffer呢
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36楼2012-07-26 19:48:32
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亘久奕皓

新虫 (初入文坛)
★
暮寒(金币+1): 谢谢参与
我也出现过这样的情况
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37楼2014-06-24 11:16:43
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简单回复
zhang731110楼
2012-05-07 08:49   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福
nanmann12楼
2012-05-07 09:10   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
秋之落叶13楼
2012-05-07 09:22   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
xiejf14楼
2012-05-07 09:33   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
dennis19872119楼
2012-05-07 13:23   回复  
暮寒(金币+1): 谢谢参与
祝福
heibi27楼
2012-05-08 09:48   回复  
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herome28楼
2012-05-08 09:59   回复  
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