| 查看: 2967 | 回复: 19 | ||
liuxing1-1至尊木虫 (知名作家)
|
[求助]
土壤总细菌16S PCR-条带不亮的问题
|
|
本人打算做T-RFLP，现在正在做土壤总细菌16S PCR，引物是27F和1492R，PCR体系是：25ul体系：dNTP（10UM） 0.5ul, 引物（10UM）各1uL，Taq E 0.5ul，10×buffer缓冲液（5U/uL），模板0.5uL，以水补齐。PCR条件是94℃预变性5 min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1 min，30 个循环，72℃下延伸10min。按照这个条件，能够P出条带，但是问题是条带不亮，甚至marker都不亮。期间，也换过EB染色液、TAE，但问题依旧。大家帮忙分析一下是什么原因吧。 [ Last edited by liuxing1-1 on 2012-4-19 at 10:05 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱 求助
已经有3人回复
- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- 关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
已经有13人回复
- 细菌16s pcr原液测序问题
已经有7人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 关于细菌RT-PCR的一些问题，希望同行探讨一下
已经有4人回复
- pcr目的条带弱，而dimer很亮，怎么调整呢？
已经有6人回复
- 【求助/交流】pcr条带不亮
已经有6人回复
- 【求助/交流】土壤细菌多样性，引物F357GC R518 PCR老是出问题，求救！
已经有11人回复
- 【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？
已经有15人回复
- 【求助/交流】细菌V3区PCR出现问题，引物为357和518，用于DGGE！
已经有8人回复
bear0329
金虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 691.1
- 散金: 26
- 帖子: 390
- 在线: 190.7小时
- 虫号: 1218361
- 注册: 2011-03-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
7楼2012-04-21 23:35:46
cheng_xiao
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 3645.2
- 帖子: 273
- 在线: 62.7小时
- 虫号: 1553648
- 注册: 2011-12-27
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2012-04-19 15:56:30
liuxing1-1
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 12843
- 散金: 1093
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 7797
- 在线: 1477.4小时
- 虫号: 825034
- 注册: 2009-08-09
- 专业: 植物化学保护
3楼2012-04-19 15:58:39
4楼2012-04-19 18:23:30
5楼2012-04-19 20:05:47
liuxing1-1
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 12843
- 散金: 1093
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 7797
- 在线: 1477.4小时
- 虫号: 825034
- 注册: 2009-08-09
- 专业: 植物化学保护
6楼2012-04-20 08:17:57
liuxing1-1
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 12843
- 散金: 1093
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 7797
- 在线: 1477.4小时
- 虫号: 825034
- 注册: 2009-08-09
- 专业: 植物化学保护
8楼2012-04-22 10:44:08
yaoyl0679
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1368.9
- 散金: 1025
- 红花: 1
- 帖子: 599
- 在线: 175小时
- 虫号: 263608
- 注册: 2006-07-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
9楼2012-04-22 16:33:31
liuxing1-1
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 12843
- 散金: 1093
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 7797
- 在线: 1477.4小时
- 虫号: 825034
- 注册: 2009-08-09
- 专业: 植物化学保护
10楼2012-04-22 17:56:06
25