| 查看: 2310 | 回复: 7 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
寻找好心人，帮帮我，关于引物以及PCR的问题！
|
|||
|
版主以及论坛内的各位高手快快现身吧，小弟实在被折磨的不行了，最近的实验相当不顺，PCR老是扩不出目的基因，不知道问题出在哪儿！5月19就要论文答辩了，过段时间还要去复试，时间太紧了！ RNA提取好之后直接反转录，用内参和设计的引物来PCR，内参可以扩出来，但是设计的引物却没有扩出条带，退火温度我用55度和50度都试了，但还是没有条带！现在感觉可能是我的引物有问题，但引物是老师帮我设计的，我也不知道是哪个模板！ 现在我的问题就是：我有引物的合成单，还有一段模板序列，但是不知道这个引物是不是以那个模板设计出来的，有没有什么办法可以检测下我的引物和模板能不能配对上啊，primer5.0可以吗？还望各位告知！ 引物：S1-4 GGCTCCCGCAAGTTAT A1 CCACCCACCCATACACT A2 CCACGCTTCACCCTACC A3 ACTGTCTGCCCACTCAC A4 GAGCACCGTTCCATACC 我说的模板序列为：CCACTTTTTTTTCCCCTTTCGCATCGCAATTGCGGNCNTGTCTTGCGTGTTCGCTGGCTGCACAAATTCTTCCCTCTCCGCGCGCCCCTAGAGAAAGCCGGCTCCCGCAAGTTATTAGGGAGTTGGTGTTACCGCCCGGGGGCCGACTGCAATGTTCTGTGTTGATCTGTCTCCCTCATCTTTTATAGTGGTGGCCCGCCGCGATGTTTGCTGATCACAGCCGGGATGCTGTTGGGGAGACTGAAAAGGAGGGAGAGTCGTCAAGCTAGGGGCATCCAAGAGAGGCAGCCTAACTTAGAGTTGCACGGTTCTGTGCGTGAGTGTATGGGTGGGTGGCTCGGTGGAGATACGCGCAGCAGCGGCGCGGGGAGGGGGGGGGAGGGGAAGCGAAGAGGCGGGGGCGGGTCGTGTGGATCGTTCAATGGGCATTAGCGCAGCGCAACTGGATACAATAGGAGGGCCGCGCTCTGTGGCAGGGGGGGGTGGGAGGCGAGCGGAGCGTGACACGTACAGGCTCTCCTAGGGTCGGCCAGCATCTGGGTGTGGGGCAGGAGCCTGGCAGTGAGTGGGCAGACAGTCGAGGTAGGGTGAAGCGTGGAGGCGAAGAAAAGGATGGGGCAAGCTGTATAAATGAACACGAGCGGCTAGGAAGTGGTGGGGAGTAGGTGTGTGGGGGTGTAGAGGGTGGGGAGAAAAAAAATTGGATTAGACGTGCGCACAATCCCGACGGTATGGAACGGTGCTCAGCGCG |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有197人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR引物设计问题，求教大神~
已经有11人回复
- 反向PCR为什么需要两套引物呀
已经有7人回复
- 问问pet-28a克隆构建引物的问题
已经有12人回复
- 关于引物设计的问题
已经有5人回复
- 求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^
已经有29人回复
- ISSR-PCR的引物问题是只用1条？
已经有9人回复
- 关于肠溶胶囊 耐酸力以及含量均匀度的测定问题
已经有5人回复
- 合成一段DNA的问题？引物，PCR
已经有13人回复
- 帮忙评价一下PCR引物
已经有11人回复
- 土壤真菌PCR，引物选择问题
已经有8人回复
- 寻找安捷伦1200液相LC系统化学工作站（REV.B03.02)详细说明书中文版
已经有4人回复
- 关于噬菌体随机肽库的一些问题，急求~
已经有13人回复
- 【求助/交流】引物合成
已经有17人回复
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR扩增
已经有32人回复
- 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
已经有21人回复
- 【求助/交流】为什么PCR引物不能反复冻融？后果会是怎样
已经有20人回复
- 【求助/交流】细菌V3区PCR出现问题，引物为357和518，用于DGGE！
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】问个问题,测PCR产物序列的时候会不会测出引物的序列?
已经有16人回复
- 关于单引物验证..
已经有5人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3, MolEPI+1): 很有用 2012-03-14 11:14:24
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3, MolEPI+1): 很有用 2012-03-14 11:14:24
| "我有引物的合成单，还有一段模板序列，但是不知道这个引物是不是以那个模板设计出来的，有没有什么办法可以检测下我的引物和模板能不能配对上啊，primer5.0可以吗？还望各位告知！"关于楼主的这个问题你可以使用DNAMAN来解决自己找一下就是了，关于PCR扩增不出来你可以设置温度梯度从42到55不等，另外你也可以在前面加一个37度循环，另外呢，你可以用DNAMAN看一下你的引物，配对多吗，看一下是不是特别容易形成二聚体，根据这个你再做调整 |
3楼2012-03-14 09:10:15
hlwnxfd2011
银虫 (小有名气)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 569.6
- 帖子: 122
- 在线: 276.3小时
- 虫号: 1324522
- 注册: 2011-06-16
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
2楼2012-03-13 19:08:03
dorecnu
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2336.7
- 红花: 10
- 帖子: 785
- 在线: 93.3小时
- 虫号: 448155
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuzhu598(金币+20): ★★★★★最佳答案 2012-03-14 20:28:50
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 很热心哈 2012-03-14 22:19:24
感谢参与，应助指数 +1
xuzhu598(金币+20): ★★★★★最佳答案 2012-03-14 20:28:50
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 很热心哈 2012-03-14 22:19:24
|
不要急，我慢慢回答你的问题： 1.模板长度为：751bp 2.S1-4 GGCTCCCGCAAGTTAT 位于模板正链100-115bp区段(16bp)；tm47℃ A1 CCACCCACCCATACACT位于模板互补链320-336区段（17bp）49.7℃ A2 CCACGCTTCACCCTACC位于模板互补链582-598区段(17bp) tm51.7℃ A3 ACTGTCTGCCCACTCAC位于模板互补链562-578(17bp)50℃ A4 GAGCACCGTTCCATACC位于模板互补链729-745(17bp)49.4℃ 就是说S1为正向引物F,其余为反向引物R.都能配对上。 3.以S1-4与A1为例，其TM值为47.6与49.7，有cross dimer但是能值很低，因该无影响，建议你降低退火温度至42-45度左右PCR。 4.引物较短，不知道是不是实验设计的特殊要求。 5.以上数据来源于primer 6，vectorNTI 10分析，这些软件就能解决你的问题，要毕业时实验还很忙一定要淡定，认真分析原因。 6.祝实验顺利，早日毕业。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
xuzhu5984楼2012-03-14 12:16:30
5楼2012-03-14 15:30:41
