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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于噬菌体随机肽库的一些问题,急求~

我最近在做噬菌体随即肽库的筛选,我用的是NEB的12肽库,筛选完一轮后测滴度没有蓝白斑,只是整版发蓝,不是稀释倍数低的情况,板上什么斑都没有,所有东西都重新灭菌了,不知道什么原因,谢谢,急求~
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每天都在做实验~研究。。。
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hflf

金虫 (小有名气)

我们是自己构建的合成库,和你们的筛选方法也不一样,只能帮顶一下了
行到水穷处,坐看云起时!
2楼2011-05-09 14:17:12
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by hflf at 2011-05-09 14:17:12:
我们是自己构建的合成库,和你们的筛选方法也不一样,只能帮顶一下了

你们筛后的检测滴度的方法是什么?我换别的方法也可以。。。
每天都在做实验~研究。。。
3楼2011-05-10 20:58:08
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hflf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wxh_0309(金币+5): 谢谢 2011-05-16 09:32:56
helper phage滴度测定用的top agarose和TG1混了helper phage倒在2*YT上,数噬菌斑;重组的phage和TG1混了倒在含氨苄的2*YT上,数单克隆。
行到水穷处,坐看云起时!
4楼2011-05-11 10:21:21
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)

我是买的随机肽库,没有helper phage.
每天都在做实验~研究。。。
5楼2011-05-16 09:30:36
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by hflf at 2011-05-11 10:21:21:
helper phage滴度测定用的top agarose和TG1混了helper phage倒在2*YT上,数噬菌斑;重组的phage和TG1混了倒在含氨苄的2*YT上,数单克隆。

我买的是随机肽库,没有helper phage。
每天都在做实验~研究。。。
6楼2011-05-16 09:31:13
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hflf

金虫 (小有名气)

那应该就是直接把你的库稀释,然后感染TG1再涂在含氨苄的2*YT上吧,应该和我们自己构建的库检测滴度差不多吧
行到水穷处,坐看云起时!
7楼2011-05-17 17:43:38
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zqh2912

新虫 (初入文坛)

我用的也是NEB12肽,最近也是这个问题,稀释到11此方后还是这样。老师让稀释到15此方后看看。建议你可以做一个4,6,8.。。16的倍数稀释彻底排除稀释倍数问题。
8楼2011-06-28 09:43:00
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fangxianjun

铁虫 (初入文坛)

直接稀释后没,差不多到109-1010左右,
9楼2011-07-21 17:00:58
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fangxianjun

铁虫 (初入文坛)

另外,宿主菌每次用的时候,最好重新挑单菌,我是做t7的。
10楼2011-07-21 17:02:17
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