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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于噬菌体随机肽库的一些问题，急求~
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于噬菌体随机肽库的一些问题，急求~

我最近在做噬菌体随即肽库的筛选，我用的是NEB的12肽库，筛选完一轮后测滴度没有蓝白斑，只是整版发蓝，不是稀释倍数低的情况，板上什么斑都没有，所有东西都重新灭菌了，不知道什么原因，谢谢，急求~
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每天都在做实验~研究。。。
1楼 2011-05-08 15:17:37
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hflf

金虫 (小有名气)
我们是自己构建的合成库，和你们的筛选方法也不一样，只能帮顶一下了
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行到水穷处，坐看云起时！
2楼2011-05-09 14:17:12
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by hflf at 2011-05-09 14:17:12:
我们是自己构建的合成库，和你们的筛选方法也不一样，只能帮顶一下了

你们筛后的检测滴度的方法是什么？我换别的方法也可以。。。
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每天都在做实验~研究。。。
3楼2011-05-10 20:58:08
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hflf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wxh_0309(金币+5): 谢谢 2011-05-16 09:32:56
helper phage滴度测定用的top agarose和TG1混了helper phage倒在2*YT上，数噬菌斑；重组的phage和TG1混了倒在含氨苄的2*YT上，数单克隆。
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行到水穷处，坐看云起时！
4楼2011-05-11 10:21:21
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)
我是买的随机肽库，没有helper phage.
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每天都在做实验~研究。。。
5楼2011-05-16 09:30:36
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wxh_0309

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by hflf at 2011-05-11 10:21:21:
helper phage滴度测定用的top agarose和TG1混了helper phage倒在2*YT上，数噬菌斑；重组的phage和TG1混了倒在含氨苄的2*YT上，数单克隆。

我买的是随机肽库，没有helper phage。
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每天都在做实验~研究。。。
6楼2011-05-16 09:31:13
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hflf

金虫 (小有名气)
那应该就是直接把你的库稀释，然后感染TG1再涂在含氨苄的2*YT上吧，应该和我们自己构建的库检测滴度差不多吧
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7楼2011-05-17 17:43:38
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zqh2912

新虫 (初入文坛)
我用的也是NEB12肽，最近也是这个问题，稀释到11此方后还是这样。老师让稀释到15此方后看看。建议你可以做一个4,6,8.。。16的倍数稀释彻底排除稀释倍数问题。
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8楼2011-06-28 09:43:00
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fangxianjun

铁虫 (初入文坛)
直接稀释后没，差不多到109-1010左右，
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9楼2011-07-21 17:00:58
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fangxianjun

铁虫 (初入文坛)
另外，宿主菌每次用的时候，最好重新挑单菌，我是做t7的。
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10楼2011-07-21 17:02:17
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