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18853850850金虫 (正式写手)
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关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
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图在图片上传中... 问题I：蛋白明显不纯，有大量蛋白存在于最终Elute Buffer中，大部分蛋白小于目的蛋白（约70KD）； 问题II：Bind Buffer中，目的蛋白含量较高，这个可能是结合树脂用量不够，或可能是带6*His标签的不完全表达短蛋白占据大量结合位点，如果真有此问题，应该怎样去解决？ 问题III：Wash buffer 起不到洗脱杂蛋白的作用，基中含有杂蛋白很少，倒有少部分是目的蛋白; 问题IV：含总蛋白量大的管（图中3）中蛋白很快析出，不知如何去溶解，没有办法保存。  SDS-PAGE电流图 |
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7楼2012-02-15 17:02:50
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