24小时热门版块排行榜    

查看: 2636  |  回复: 3

lt7510578

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达His-tag怎么去除

本新手准备用原核表达蛋白免疫动物,制备多克隆抗体,涉及到融合蛋白His-tag的去除,虽然有人说标签的免疫原性不高,但还是怕影响western blot。求助各位高手有没有好的方法,给一点意见,跪谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的什么载体啊?一般标签后面都会紧跟一个蛋白酶切位点的,找来载体图谱看一下就知道是什么蛋白酶了,比如EK酶、凝血酶还是其他的。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2013-01-08 21:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lt7510578: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-01-09 09:49:25
小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2013-01-09 11:12:09
如果是载体上带的His-tag通常是可以用酶切去的,如果是克隆基因时自己加的tag就没有办法啦。如果只是做western,不用管his-tag。即使制备的多克隆抗血清能抗His-tag,至少也是抗你的特异蛋白的,而且目的蛋白的抗原性绝对比his-tag强很多。一般的native蛋白也不会和his-tag抗体反应。
3楼2013-01-09 08:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目前最简单的方法就是在你设计时候,在目的蛋白和标签之间加上一个酶切位点,得到蛋白后,用相应的酶去消化,之后过his柱子,收集流穿液。得到你的去标签蛋白。
4楼2013-01-09 09:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lt7510578 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境调剂 +4 chenhanheng 2026-03-02 4/200 2026-03-02 20:23 by hypershenger
[考研] 0856求调剂285 +11 吕仔龙 2026-02-28 11/550 2026-03-02 20:15 by hypershenger
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:59 by hypershenger
[考研] 化学,材料,环境类求调剂 +7 考研版棒棒 2026-03-02 7/350 2026-03-02 19:56 by hypershenger
[考研] 271求调剂 +3 Ricardo1113 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:53 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +10 yunziaaaaa 2026-03-01 11/550 2026-03-02 19:17 by caszguilin
[考研] 268求调剂 +3 好运连绵不绝 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:05 by zhukairuo
[考研] 一志愿中石油(华东)本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 290求调剂 +6 ErMiao1020 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:14 by lature00
[考研] 一志愿华中科技大学,化学专业344分,求调剂 +3 邢xing1 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:32 by houyaoxu
[考研] 289求调剂 +3 BrightLL 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:28 by 杨杨杨紫
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 295求调剂 +8 19171856320 2026-02-28 8/400 2026-03-02 11:19 by yuchj
[基金申请] 此成果不能导入原因:元数据必填信息不完整,可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 材料调剂 +6 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:42 by Jy?
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见