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lt7510578

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达His-tag怎么去除

本新手准备用原核表达蛋白免疫动物,制备多克隆抗体,涉及到融合蛋白His-tag的去除,虽然有人说标签的免疫原性不高,但还是怕影响western blot。求助各位高手有没有好的方法,给一点意见,跪谢!
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的什么载体啊?一般标签后面都会紧跟一个蛋白酶切位点的,找来载体图谱看一下就知道是什么蛋白酶了,比如EK酶、凝血酶还是其他的。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2013-01-08 21:18:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lt7510578: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-01-09 09:49:25
小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2013-01-09 11:12:09
如果是载体上带的His-tag通常是可以用酶切去的,如果是克隆基因时自己加的tag就没有办法啦。如果只是做western,不用管his-tag。即使制备的多克隆抗血清能抗His-tag,至少也是抗你的特异蛋白的,而且目的蛋白的抗原性绝对比his-tag强很多。一般的native蛋白也不会和his-tag抗体反应。
3楼2013-01-09 08:29:04
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目前最简单的方法就是在你设计时候,在目的蛋白和标签之间加上一个酶切位点,得到蛋白后,用相应的酶去消化,之后过his柱子,收集流穿液。得到你的去标签蛋白。
4楼2013-01-09 09:14:39
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