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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达His-tag怎么去除
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lt7510578

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达His-tag怎么去除

本新手准备用原核表达蛋白免疫动物，制备多克隆抗体，涉及到融合蛋白His-tag的去除，虽然有人说标签的免疫原性不高，但还是怕影响western blot。求助各位高手有没有好的方法，给一点意见，跪谢！
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1楼 2013-01-08 21:01:17
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么载体啊？一般标签后面都会紧跟一个蛋白酶切位点的，找来载体图谱看一下就知道是什么蛋白酶了，比如EK酶、凝血酶还是其他的。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2013-01-08 21:18:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lt7510578: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-01-09 09:49:25
小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2013-01-09 11:12:09
如果是载体上带的His-tag通常是可以用酶切去的，如果是克隆基因时自己加的tag就没有办法啦。如果只是做western，不用管his-tag。即使制备的多克隆抗血清能抗His-tag，至少也是抗你的特异蛋白的，而且目的蛋白的抗原性绝对比his-tag强很多。一般的native蛋白也不会和his-tag抗体反应。
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3楼2013-01-09 08:29:04
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目前最简单的方法就是在你设计时候，在目的蛋白和标签之间加上一个酶切位点，得到蛋白后，用相应的酶去消化，之后过his柱子，收集流穿液。得到你的去标签蛋白。
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4楼2013-01-09 09:14:39
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