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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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18853850850(金币+5): 2012-02-14 15:53:30
silicare(金币+3, BioEPI+1): 鼓励发帖交流 2012-02-16 12:57:59
18853850850(金币+5): 有帮助 2012-03-01 14:38:56
18853850850: 金币+5 2012-03-19 12:10:00
1 buffer的pH应该避免在目的蛋白的pI值。
2 蛋白挂柱不明显的话可以考虑降低binding buffer中咪唑的浓度到5 mM,或者加入变性剂,以及上样时速度要控制在低速或反复上样以增加目的蛋白与柱子的结合时间
3 为了得到较纯的目的蛋白,可以增加洗涤次数,采用梯度洗脱。
4 蛋白可以用低浓度的10 mM Tris溶液保存,蛋白浓度不要过高。
5 检查表达菌中目的蛋白DNA序列是不是正确,终止子位置。
纯化时柱子最好要保持在低温环境,以防止蛋白大量降解。
5楼2012-02-14 14:27:57
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