24小时热门版块排行榜    

查看: 5382  |  回复: 34
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lyta0

木虫 (小有名气)

[求助] 大片段PCR扩增求助

我要扩增一个片段为3623bp的DNA,条件如下:98℃1分钟,然后是四十个循环:98℃10秒,52℃10秒,68℃3分30秒,最后是68℃6分钟,扩了好几次都失败,求助各位高手
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 实验求助

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyta0

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-19 00:04:46:
呵呵,我们是鼓励反馈的哦~
祝实验顺利哈

bad news, 还是没有问题,证明不是试剂的问题,看来得改条件了
5楼2012-01-19 01:07:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
lyta0(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-18 21:13:19
3.6kb并不大,应该不难。
我觉得变性和退火的时间短了点,我们实验室一般用95℃/30秒变性,55℃/45秒退火,我自己用的是95℃/20秒变性,55℃/30秒退火。上面说的是常用的条件,如果扩增不出来就降低退火温度,特异性不高就提高退火温度,一般都能做出来的。
Taq酶每分钟扩增1kb,延伸时间3分30秒感觉不够。虽然一般这样也能做出来,但是既然你没做出来,我建议延伸时间改成4分钟。
另外,试剂也可能出问题。你的试剂做其他PCR是否正常呢?
2楼2012-01-18 18:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyta0

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-18 18:59:32:
3.6kb并不大,应该不难。
我觉得变性和退火的时间短了点,我们实验室一般用95℃/30秒变性,55℃/45秒退火,我自己用的是95℃/20秒变性,55℃/30秒退火。上面说的是常用的条件,如果扩增不出来就降低退火温度,特 ...

我现在正在用别人的dNTP和buffer重新PCR,希望能P出来,结果再告诉你,但是我以前也是这个试剂,P1000多bp的就能P出来
3楼2012-01-18 21:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lyta0 at 2012-01-18 21:05:55:
我现在正在用别人的dNTP和buffer重新PCR,希望能P出来,结果再告诉你,但是我以前也是这个试剂,P1000多bp的就能P出来

呵呵,我们是鼓励反馈的哦~
祝实验顺利哈
4楼2012-01-19 00:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 求调剂 +5 Mqqqqqq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:46 by zhukairuo
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
信息提示
请填处理意见