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鱼山听涛

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 分析得很有道理! 2012-01-20 14:10:38
lyta0(金币+5): 2012-01-20 16:07:36
1、如果已知所扩序列,看一下GC含量。如果GC含量高就改用GC buffer。
2、普通Taq扩增3-4 kb条带没有问题,如果不放心,可以用Takara的LA Taq。
3、解链和退火时间延长到30 sec。
4、Taq系列的扩增速度是2 kb/min,所以你用3.5 min延伸没有问题,循环数改为30即可,过多没有用处。
5、退火温度应该根据引物确定,一般为引物Tm减去5到10度。你没有批出来,可以考虑降低退火温度。
6、引物量是否够?有引物带吗?如果没有,增加引物用量。
7、模板量是否够?
书到用时方恨少
14楼2012-01-20 09:31:56
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