24小时热门版块排行榜    

查看: 5316  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

笔冰河

银虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR无条带

双酶切T载体和表达载体后,回收获得目的片段和载体,连接,转化,挑18个单克隆,菌落PCR全部无条带,这是怎么回事,目的片段确定酶切成功,表达载体无法从电泳图上确定是否两个位点都酶切成功(两个酶切位点紧连着)。可能是什么原因呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): good 2011-12-22 18:35:45
一般条件下,菌液PCR应该很浓的,不会那么淡,但是可以提质粒看看,去磷酸化的酶公司都有卖,就提醒一点,反应完后千万别按说明书说的去抽提纯化,可以直接用反应液连接
8楼2011-12-20 20:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

xhy0016

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
笔冰河(金币+1): 2011-12-20 14:40:56
你为什么不提质粒跑电泳验证一下,而非要直接菌落PCR呢
2楼2011-12-19 19:09:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笔冰河

银虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): 我也觉得~ 2011-12-27 17:25:42
引用回帖:
: Originally posted by xhy0016 at 2011-12-19 19:09:00:
你为什么不提质粒跑电泳验证一下,而非要直接菌落PCR呢

一般不是都先菌落PCR吗,几十个菌落,提质粒成本太高了,而且还需要过夜摇菌
3楼2011-12-20 08:35:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
笔冰河(金币+1): 去磷酸化的条件是什么呢,要自己配溶液吗,还是有试剂盒买 2011-12-20 14:40:34
西瓜(金币+3): Good 2011-12-22 18:34:35
有这么多假阳性?一般我连接载体,阳性率高于90%。只有当PCR直接酶切时候,有部份结果连接错误。所以我觉的还是酶切不完全吧。菌液PCR有做对照吗?如果是阳性一般都有条带。楼主如果不想更改酶切体系,可以试试去磷酸化。
4楼2011-12-20 09:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 6/300 2026-03-18 10:21 by kkcoco25
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见