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笔冰河

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[求助] 菌落PCR无条带

双酶切T载体和表达载体后，回收获得目的片段和载体，连接，转化，挑18个单克隆，菌落PCR全部无条带，这是怎么回事，目的片段确定酶切成功，表达载体无法从电泳图上确定是否两个位点都酶切成功（两个酶切位点紧连着）。可能是什么原因呢？

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1楼 2011-12-19 19:02:26

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西瓜

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引用回帖:

17楼: Originally posted by xujie158 at 2011-12-27 16:48:45:
菌P其实一般都是没有问题的，提质粒PCR只适合做平时小量的一个验证，假如你有大量的连接要做，你基本上就不能选择提质粒之后再PCR，因为太浪费时间，另外对于一些新手，辛辛苦苦提半天再没有，更容易打消积极性。 ...

我也赞成。菌落PCR适合大批量筛选，可以用来做第一次的筛选。挑到几个阳性克隆后，再提质粒进行酶切验证，这样鉴定出来的阳性克隆基本不会错了。

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18楼2011-12-27 17:29:59

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