楼: Originally posted by zhengli123 at 2011-12-22 20:51:07:
太多的假阳性菌落，很可能就是载体没切完全

楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2011-12-23 11:25:40:
如果你的目的片段和载体的酶切是同时进行的话，目的片段切的很好，载体应该也切得没问题了。
以我的经验，如果菌落PCR有很亮的条带，最后提质粒酶切鉴定一般都是阳性的，你的条带很弱，基本就是假阳性，建议试试 ...

5楼: Originally posted by 青菜小虫 at 2011-12-20 10:21:54:
菌落PCR太不可靠，我一般摇菌提质粒，质粒跑电泳大小合适的话，再做酶切验证，溶液ⅠⅡⅢ都是自己配的，实验都是很麻烦，想走捷径，就有不确定性。祝实验顺利。

17楼: Originally posted by xujie158 at 2011-12-27 16:48:45:
菌P其实一般都是没有问题的，提质粒PCR只适合做平时小量的一个验证，假如你有大量的连接要做，你基本上就不能选择提质粒之后再PCR，因为太浪费时间，另外对于一些新手，辛辛苦苦提半天再没有，更容易打消积极性。 ...

5楼: Originally posted by 青菜小虫 at 2011-12-20 10:21:54:
菌落PCR太不可靠，我一般摇菌提质粒，质粒跑电泳大小合适的话，再做酶切验证，溶液ⅠⅡⅢ都是自己配的，实验都是很麻烦，想走捷径，就有不确定性。祝实验顺利。