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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
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smallland

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题

用硫酸铵沉淀水溶液中的蛋白质的实验。如果硫酸铵未用H2S预处理，会对蛋白沉淀实验造成什么影响？
书上说硫酸铵中可能有重金属元素，而重金属会对蛋白质的巯基很敏感。问题是“敏感”是什么影响？是让蛋白质变性？还是别的什么？希望行家解答。谢谢！
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起飞的笨鸟
1楼 2011-11-08 04:31:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

txyamy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

smallland(金币+3): 谢谢！能说说具体的操作方法吗？比如加多少EDTA？EDTA螯合重金属后是否沉淀？我对此不熟悉。 2011-11-08 17:03:06
用EDTA络合重金属就可以了吧，我一般都这样做。
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2楼2011-11-08 08:26:34
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天(金币+3, BioEPI+1): 不错 2011-11-08 09:15:55
smallland(金币+9): 谢谢！请问EDTA络合重金属后再如何处理？ 2011-11-08 17:05:53
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸），在重金属离子的存在下，可以二硫键，导致蛋白结构破坏。
    所说“敏感”是应为，金属离子在微量（甚至痕量）状态向，就可以破坏蛋白结构！
    正如二楼所说，加入适量EDTA即可络合金属离子！
    刚开始加入饱和硫酸铵时，切记速度不能过快，以防影响蛋白水化膜的剥落！
    做透析时，透析袋也需要EDTA处理，原因同上！
    透析过后的蛋白如有变性（即少许沉淀产生），可用低速离心去除！
    祝君顺利，早日成功！
    如有不妥地方，还请高人指正！
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
3楼2011-11-08 08:59:49
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普通回帖

zzqbaidu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 159236478 at 2011-11-08 08:59:49:
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸），在重金属离子的存在下，可以二硫键，导致蛋白结构破坏。
    所说“敏感”是应为，金属离子在微量（甚至痕量）状态向，就可以破坏蛋白结构！
    正如二楼所说，加入适量EDTA ...

奥 原来如此啊 怪不得我透析后蛋白有一点沉淀  可能是新买的透析袋没处理好，透析完了闻了下透析袋还有股塑料味，高人啊，我以后注意了
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4楼2011-11-08 09:23:15
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 159236478 at 2011-11-08 08:59:49:
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸），在重金属离子的存在下，可以二硫键，导致蛋白结构破坏。
    所说“敏感”是应为，金属离子在微量（甚至痕量）状态向，就可以破坏蛋白结构！
    正如二楼所说，加入适量EDTA ...

再请教下  还有那个低速离心一般为多少转啊 谢谢
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5楼2011-11-08 09:24:45
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baodongq

禁虫 (正式写手)
smallland(金币+3): 谢谢！ 2011-11-08 17:20:11
smallland(金币+3): 谢谢！ 2011-11-08 17:34:11
本帖内容被屏蔽
6楼2011-11-08 13:11:59
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

smallland(金币+7): 谢谢您的耐心帮助！ 2011-11-09 23:00:50
因为所用的是饱和硫酸铵(加热后，还有固体硫酸铵沉淀为止）,加入EDTA络合金属离子后，就回沉淀到容器的底部，并不影响上面溶液的使用。
   补充一点：所用的饱和硫酸铵溶液一定要调PH值，原则上要比纯化蛋白的等电点稍高。（个人建议，可调PH=8.2 进行，不合适再作调整，特殊蛋白除外）
   回答4楼：低速离心如楼上所说，3000--5000都可以，5min。以不超过8000转为宜！
   不太同意硫酸铵固体，原因：
   1）固体加入不方便
   2）硫酸铵固体可能还有一直讨论的重金属离子
   3）PH值不宜调整
   4）固体加入容易引起局部浓度过高，影响沉淀的形成。
回答如有不妥之处，还请共同学习！
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
7楼2011-11-09 10:40:31
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cexoihtydx

金虫 (正式写手)
有硫酸铵沉淀的实验步骤吗？以前没做过，希望楼上的高手们指点。谢谢
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不放弃，日子总有阳光，追求总有希望！
8楼2011-12-13 15:13:22
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glc880824

金虫 (小有名气)
不用固体加，怎么加？具体方法？
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9楼2012-11-03 22:14:39
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yangyangaini

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by txyamy at 2011-11-08 08:26:34
用EDTA络合重金属就可以了吧，我一般都这样做。

请问是在饱和溶液中直接加EDTA 吗？加多少啊？
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10楼2014-04-20 22:41:57
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