| 查看: 5574 | 回复: 12 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
smallland至尊木虫 (著名写手)
|
[求助]
求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
|
||
|
用硫酸铵沉淀水溶液中的蛋白质的实验。如果硫酸铵未用H2S预处理，会对蛋白沉淀实验造成什么影响？ 书上说硫酸铵中可能有重金属元素，而重金属会对蛋白质的巯基很敏感。问题是“敏感”是什么影响？是让蛋白质变性？还是别的什么？希望行家解答。谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然评审意见
已经有12人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
-
系统查不到
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有12人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有3人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有8人回复
-
基金不中，共勉
已经有11人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有9人回复
-
2026年叶企孙基金
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 可溶性蛋白透析后出现沉淀，是否可以用来做动物实验
已经有8人回复
- 蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题
已经有11人回复
- 求教，硫酸铵分级沉淀后离心沉淀不下来的原因
已经有4人回复
- 蛋白透析后变成了褐色沉淀
已经有4人回复
- 如何富集沉淀植物（草莓）中的蛋白质？
已经有5人回复
- 酶的硫酸铵沉淀
已经有18人回复
- 蛋白样品解冻后沉淀
已经有7人回复
- 碱溶提取的蛋白质沉淀不下来呢
已经有9人回复
- 饱和硫酸铵沉淀
已经有4人回复
- 硫酸铵沉淀的一些问题，求高手帮忙看一下！
已经有12人回复
- 硫酸铵沉淀后我的目的蛋白含量没有明显增多，怎么回事啊？？？？？？？？？？？
已经有4人回复
- 透析后蛋白沉淀
已经有18人回复
- 硫酸铵沉淀脂肪酶的问题
已经有5人回复
- 乙腈沉淀蛋白的一般用量
已经有6人回复
- 硫酸铵梯度法主动载药透析除去硫酸铵时，对透析液有要求吗
已经有11人回复
- 硫酸铵沉淀蛋白质
已经有3人回复
- 硫酸铵沉淀蛋白质
已经有16人回复
- 【求助】蛋白酶解液沉淀无法分离的问题
已经有23人回复
- 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白
已经有12人回复
- 【求助/交流】请问哪位懂硫铵沉淀，给点经验！
已经有6人回复
- 【求助】硫酸铵pH的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】为什么蛋白质盐析中常用的硫酸铵为中性盐？
已经有11人回复
- 【求助/交流】血清中蛋白质多少转离心才能使其沉淀?
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于硫酸铵沉淀的问题
已经有7人回复
- 【求助】生物样品的前处理-沉淀蛋白质
已经有19人回复
- 【求助/交流】硫酸铵分级沉淀
已经有13人回复
txyamy
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2403.5
- 散金: 307
- 红花: 2
- 帖子: 271
- 在线: 189.7小时
- 虫号: 1035045
- 注册: 2010-06-03
- 专业: 食品加工技术
2楼2011-11-08 08:26:34
159236478
至尊木虫 (知名作家)
游来游去之一级游神
- BioEPI: 3
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 36593.4
- 散金: 250
- 红花: 8
- 帖子: 9318
- 在线: 805.7小时
- 虫号: 407039
- 注册: 2007-06-19
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
看天(金币+3, BioEPI+1): 不错 2011-11-08 09:15:55
smallland(金币+9): 谢谢！请问EDTA络合重金属后再如何处理？ 2011-11-08 17:05:53
看天(金币+3, BioEPI+1): 不错 2011-11-08 09:15:55
smallland(金币+9): 谢谢！请问EDTA络合重金属后再如何处理？ 2011-11-08 17:05:53
|
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸），在重金属离子的存在下，可以二硫键，导致蛋白结构破坏。 所说“敏感”是应为，金属离子在微量（甚至痕量）状态向，就可以破坏蛋白结构！ 正如二楼所说，加入适量EDTA即可络合金属离子！ 刚开始加入饱和硫酸铵时，切记速度不能过快，以防影响蛋白水化膜的剥落！ 做透析时，透析袋也需要EDTA处理，原因同上！ 透析过后的蛋白如有变性（即少许沉淀产生），可用低速离心去除！ 祝君顺利，早日成功！ 如有不妥地方，还请高人指正！ |
3楼2011-11-08 08:59:49
zzqbaidu
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3582.9
- 散金: 112
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 622
- 在线: 246.3小时
- 虫号: 739759
- 注册: 2009-04-03
- 专业: 天然药物化学
4楼2011-11-08 09:23:15
zzqbaidu
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3582.9
- 散金: 112
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 622
- 在线: 246.3小时
- 虫号: 739759
- 注册: 2009-04-03
- 专业: 天然药物化学
5楼2011-11-08 09:24:45
smallland(金币+3): 谢谢！ 2011-11-08 17:20:11
smallland(金币+3): 谢谢！ 2011-11-08 17:34:11
smallland(金币+3): 谢谢！ 2011-11-08 17:34:11
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2011-11-08 13:11:59
159236478
至尊木虫 (知名作家)
游来游去之一级游神
- BioEPI: 3
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 36593.4
- 散金: 250
- 红花: 8
- 帖子: 9318
- 在线: 805.7小时
- 虫号: 407039
- 注册: 2007-06-19
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
smallland(金币+7): 谢谢您的耐心帮助！ 2011-11-09 23:00:50
|
因为所用的是饱和硫酸铵(加热后，还有固体硫酸铵沉淀为止）,加入EDTA络合金属离子后，就回沉淀到容器的底部，并不影响上面溶液的使用。 补充一点：所用的饱和硫酸铵溶液一定要调PH值，原则上要比纯化蛋白的等电点稍高。（个人建议，可调PH=8.2 进行，不合适再作调整，特殊蛋白除外） 回答4楼：低速离心如楼上所说，3000--5000都可以，5min。以不超过8000转为宜！ 不太同意硫酸铵固体，原因： 1）固体加入不方便 2）硫酸铵固体可能还有一直讨论的重金属离子 3）PH值不宜调整 4）固体加入容易引起局部浓度过高，影响沉淀的形成。 回答如有不妥之处，还请共同学习！ |
7楼2011-11-09 10:40:31
cexoihtydx
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 12
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 581.3
- 散金: 906
- 红花: 5
- 帖子: 766
- 在线: 263.3小时
- 虫号: 722752
- 注册: 2009-03-14
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
8楼2011-12-13 15:13:22
glc880824
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1634.9
- 散金: 10
- 帖子: 82
- 在线: 56.4小时
- 虫号: 1682770
- 注册: 2012-03-11
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2012-11-03 22:14:39
10楼2014-04-20 22:41:57
10