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smallland

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题

用硫酸铵沉淀水溶液中的蛋白质的实验。如果硫酸铵未用H2S预处理,会对蛋白沉淀实验造成什么影响?
书上说硫酸铵中可能有重金属元素,而重金属会对蛋白质的巯基很敏感。问题是“敏感”是什么影响?是让蛋白质变性?还是别的什么?希望行家解答。谢谢!
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起飞的笨鸟
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天(金币+3, BioEPI+1): 不错 2011-11-08 09:15:55
smallland(金币+9): 谢谢!请问EDTA络合重金属后再如何处理? 2011-11-08 17:05:53
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸),在重金属离子的存在下,可以二硫键,导致蛋白结构破坏。
    所说“敏感”是应为,金属离子在微量(甚至痕量)状态向,就可以破坏蛋白结构!
    正如二楼所说,加入适量EDTA即可络合金属离子!
    刚开始加入饱和硫酸铵时,切记速度不能过快,以防影响蛋白水化膜的剥落!
    做透析时,透析袋也需要EDTA处理,原因同上!
    透析过后的蛋白如有变性(即少许沉淀产生),可用低速离心去除!
    祝君顺利,早日成功!
    如有不妥地方,还请高人指正!
云山苍苍,江水泱泱,先生之风,山高水长
3楼2011-11-08 08:59:49
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txyamy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

smallland(金币+3): 谢谢!能说说具体的操作方法吗?比如加多少EDTA?EDTA螯合重金属后是否沉淀?我对此不熟悉。 2011-11-08 17:03:06
用EDTA络合重金属就可以了吧,我一般都这样做。
2楼2011-11-08 08:26:34
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 159236478 at 2011-11-08 08:59:49:
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸),在重金属离子的存在下,可以二硫键,导致蛋白结构破坏。
    所说“敏感”是应为,金属离子在微量(甚至痕量)状态向,就可以破坏蛋白结构!
    正如二楼所说,加入适量EDTA ...

奥 原来如此啊 怪不得我透析后蛋白有一点沉淀  可能是新买的透析袋没处理好,透析完了闻了下透析袋还有股塑料味,高人啊,我以后注意了
帮忙点下我的网站http://www.yayadan.com 欢迎光临!
4楼2011-11-08 09:23:15
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zzqbaidu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 159236478 at 2011-11-08 08:59:49:
因为蛋白中含有二硫键(如胱氨酸),在重金属离子的存在下,可以二硫键,导致蛋白结构破坏。
    所说“敏感”是应为,金属离子在微量(甚至痕量)状态向,就可以破坏蛋白结构!
    正如二楼所说,加入适量EDTA ...

再请教下  还有那个低速离心一般为多少转啊 谢谢
帮忙点下我的网站http://www.yayadan.com 欢迎光临!
5楼2011-11-08 09:24:45
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