应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物回收之后跑胶浓度过低
181/2返回列表12下一页
查看: 4566  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shuifen1108

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物回收之后跑胶浓度过低

PCR之后，切胶，用Takara回收胶试剂盒回收的，结果跑胶之后发现浓度很低，请教各位大侠，能不能用于下一步的PCR？切还有就是回收产率低的原因有哪些？完胶之后放入-20度保存一段时间再回收，会对回收产率有影响吗？注明所用的marker DL2000,4ul，样品每个3ul。





[ Last edited by shuifen1108 on 2011-11-2 at 20:09 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-02 20:06:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shuifen1108

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-02 21:39:53:
仔细看看试剂盒的说明书，上面会有详细的问题说明。Takara家的说明书编得还是不错滴
[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-2 at 21:44 ]

按照说明书一步步来的，而且第一步溶解胶的时候还特别小心，加热了15min左右才开始往下做的，所以胶肯定完全溶解了，下面都很简单，以前没出现过这种情况，会不会试剂盒有问题，买了好久了。3Q
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-11-02 22:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
shuifen1108(金币+1): 2011-11-03 11:24:32
西瓜(金币+3): good 2011-11-05 21:58:54
1.可能你本身PCR产物都不是很亮，这一点你可以多扩几管PCR解决。
2.胶回收是有一个回收率的问题，一般在50-70%，如果你只扩到了100ngPCR产物，那经跑胶再切胶再过柱回收，估计能得到50ng也就不错了。。。
3.溶胶时间的确不需那么长，充分溶了即可，溶胶液时间过久一般对DNA有损伤。
4.联系Takara技术支持寻求帮助。
赞一下(2人) 回复此楼
伟大航线....
8楼2011-11-03 10:28:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wcwluwei

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2011-11-02 21:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): 鼓励新虫多发贴！鼓励多来分子生物版！有奖励！ 2011-11-02 21:24:55
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-11-02 21:25:03
shuifen1108(金币+2): 2011-11-03 11:23:51
本帖内容被屏蔽
3楼2011-11-02 21:24:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
仔细看看试剂盒的说明书，上面会有详细的问题说明。Takara家的说明书编得还是不错滴

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-2 at 21:44 ]
赞一下 回复此楼
4楼2011-11-02 21:39:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuifen1108

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wcwluwei at 2011-11-02 21:22:40:
胶跑得真一般啊  怎么拍的照啊！  晕   用来PCR是没问题的，一点浓度就可以的。

关键是回收之后的浓度真的很低，我也没得办法啊。marker跑的还可以吧，真有你说的那么差吗
赞一下 回复此楼
6楼2011-11-02 22:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Constig

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

shuifen1108(金币+2): 2011-11-03 11:24:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by shuifen1108 at 2011-11-02 22:35:17:
按照说明书一步步来的，而且第一步溶解胶的时候还特别小心，加热了15min左右才开始往下做的，所以胶肯定完全溶解了，下面都很简单，以前没出现过这种情况，会不会试剂盒有问题，买了好久了。3Q

溶胶的时间太长会对DNA片段有损伤的，另外回收试剂盒的损失率都会很高。不过如果只是用来PCR的话，完全没有问题的。
赞一下 回复此楼
让我们用微笑面对苦难吧
7楼2011-11-03 09:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuifen1108

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by longrna at 2011-11-03 10:28:54:
1.可能你本身PCR产物都不是很亮，这一点你可以多扩几管PCR解决。
2.胶回收是有一个回收率的问题，一般在50-70%，如果你只扩到了100ngPCR产物，那经跑胶再切胶再过柱回收，估计能得到50ng也就不错了。。。
3.溶胶 ...

可能真的是我溶胶时间太长了，害怕没有完全溶解，造成回收率降低，没想到过犹不及啊，谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2011-11-03 11:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuifen1108

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by longrna at 2011-11-03 10:28:54:
1.可能你本身PCR产物都不是很亮，这一点你可以多扩几管PCR解决。
2.胶回收是有一个回收率的问题，一般在50-70%，如果你只扩到了100ngPCR产物，那经跑胶再切胶再过柱回收，估计能得到50ng也就不错了。。。
3.溶胶 ...

I am sorry,本来想给三个金币的  结果只剩下一个了，非常对不起啊。
赞一下 回复此楼
10楼2011-11-03 11:25:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shuifen1108 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 7/350 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +4 SCSIOyxguo 2026-09-03 7/350 2026-09-05 10:39 by Honglianlian
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭