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shuifen1108

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物回收之后跑胶浓度过低

PCR之后,切胶,用Takara回收胶试剂盒回收的,结果跑胶之后发现浓度很低,请教各位大侠,能不能用于下一步的PCR?切还有就是回收产率低的原因有哪些?完胶之后放入-20度保存一段时间再回收,会对回收产率有影响吗?注明所用的marker DL2000,4ul,样品每个3ul。





[ Last edited by shuifen1108 on 2011-11-2 at 20:09 ]
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
shuifen1108(金币+1): 2011-11-03 11:24:32
西瓜(金币+3): good 2011-11-05 21:58:54
1.可能你本身PCR产物都不是很亮,这一点你可以多扩几管PCR解决。
2.胶回收是有一个回收率的问题,一般在50-70%,如果你只扩到了100ngPCR产物,那经跑胶再切胶再过柱回收,估计能得到50ng也就不错了。。。
3.溶胶时间的确不需那么长,充分溶了即可,溶胶液时间过久一般对DNA有损伤。
4.联系Takara技术支持寻求帮助。
伟大航线....
8楼2011-11-03 10:28:54
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2011-11-02 21:22:40
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): 鼓励新虫多发贴!鼓励多来分子生物版!有奖励! 2011-11-02 21:24:55
wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-11-02 21:25:03
shuifen1108(金币+2): 2011-11-03 11:23:51
本帖内容被屏蔽

3楼2011-11-02 21:24:03
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

仔细看看试剂盒的说明书,上面会有详细的问题说明。Takara家的说明书编得还是不错滴

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-2 at 21:44 ]
4楼2011-11-02 21:39:53
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