应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接PCR检测
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
141/2返回列表12下一页
查看: 935  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[求助] 连接PCR检测

对连接转化挑取的菌液进行PCR反应，为了验证连接成功，扩增载体上的目的基因2000bp, 为什么会出来小分子量1000左右的条带啊 ，是PCR的问题，还是我的连接失败啊，原因在何处啊？



各位高手帮着分析一下啊
谢谢了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-08 08:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-08 18:16:42
出现过同样的问题，
可能是引物特异性不好，扩增出载体的部分片段造成的，建议选择一两个亮点的，提质粒酶切鉴定看看。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-08-08 08:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-08-08 18:16:54
你之前PCR的时候很完整么？？还有你连得是T载体还是通过酶切位点连接的？？怀疑你的引物有问题，特异性不好
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-08 09:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-08 18:17:04
1.可能是你的引物特异性不好，在模板的其他位置有非特异性扩增
2.还有一个原因是气溶胶的污染
你的目的条带已经扩出来说明应该是连上了，再做的酶切验证一下
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-08-08 09:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wzqno at 2011-08-08 09:31:57:
你之前PCR的时候很完整么？？还有你连得是T载体还是通过酶切位点连接的？？怀疑你的引物有问题，特异性不好

之前做克隆时PCR可以出现目的条带，我是通过酶切位点连接的。如果是假阳性，那么出现的原因有可能是什么呢？
赞一下 回复此楼
5楼2011-08-08 10:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-08 09:38:41:
1.可能是你的引物特异性不好，在模板的其他位置有非特异性扩增
2.还有一个原因是气溶胶的污染
你的目的条带已经扩出来说明应该是连上了，再做的酶切验证一下

您的意思是扩增出其他位置的非目的基因片段？ 由此也可推断目的基因可能连上了。   有没有可能会扩增到载体某个位置的片段啊？
赞一下 回复此楼
6楼2011-08-08 10:07:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 暗夜懒猫 at 2011-08-08 10:07:09:
您的意思是扩增出其他位置的非目的基因片段？ 由此也可推断目的基因可能连上了。   有没有可能会扩增到载体某个位置的片段啊？

我看到你的图上有两条片段啊，难道没有目的片段的条带？你最好能把mark的条带标一下
赞一下 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2011-08-08 11:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-08 18:17:20
暗夜懒猫(金币+1): 2011-08-25 08:13:55
这种情况我很少遇到，不过你可以进一步进行一下提质粒，然后双酶切验证一下；
或者重新进行连接，然后进行PCR验证，不过按照你图中那些条带应该都是你选取的样进行PCR的吧？我就很奇怪了，为什么P出来的大小基本都一样呢？如果是非特异性的话，那么不应该全部都是非特异性的；
建议你先提取质粒酶切看看，然后再做定夺。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-08-08 11:28:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-08 11:25:51:
我看到你的图上有两条片段啊，难道没有目的片段的条带？你最好能把mark的条带标一下

加样孔在下面，那最上面的是引物二聚体吧，可能就是因为引物特异性不好，所以剩余的引物形成二聚体了，不过既然之前PCR克隆基因的时候都没问题，这就比较费解了
赞一下 回复此楼
9楼2011-08-08 14:55:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 暗夜懒猫 at 2011-08-08 10:01:40:
之前做克隆时PCR可以出现目的条带，我是通过酶切位点连接的。如果是假阳性，那么出现的原因有可能是什么呢？

我又看了一遍电泳结果，如果你用的是DL2000 DNA marker的话，出现的条带只有600-700bp，没有你说的1000bp吧？？之前测序过没？？之前PCR的时候，你确定扩增产物是2000bp左右？？怀疑你是不是用错引物了？？
赞一下 回复此楼
10楼2011-08-08 15:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 暗夜懒猫 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 计算机11408，286分求调剂 +4 木子念晞 2026-04-05 4/200 2026-04-05 15:23 by vjjb
[考研] 复试调剂 +7 春日来信- 2026-04-03 7/350 2026-04-05 12:50 by Hdyxbekcb
[考研] 本科211，293分请求调剂 +7 莲菜就是藕吧 2026-04-03 8/400 2026-04-05 11:41 by arrow8852
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
[考研] 求材料调剂，一志愿郑州大学289分 +15 硕星赴 2026-04-03 15/750 2026-04-04 01:01 by userper
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[考研] 292求调剂 +21 是妍子也是研子 2026-03-30 22/1100 2026-04-03 21:44 by qlm5820
[考研] 320求调剂 +5 振—TZ 2026-04-02 5/250 2026-04-03 14:42 by fxue1114
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 120+4 Yishengeryi 2026-03-30 6/300 2026-04-02 17:19 by Yishengeryi
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 一志愿346上海大学生物学 +3 上海大学346调剂 2026-04-01 3/150 2026-04-02 08:36 by w虫虫123
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 食品学硕362求调剂 +3 xuanxianxian 2026-04-01 3/150 2026-04-01 21:05 by 啊李999
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭