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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

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[求助] 连接PCR检测

对连接转化挑取的菌液进行PCR反应，为了验证连接成功，扩增载体上的目的基因2000bp, 为什么会出来小分子量1000左右的条带啊，是PCR的问题，还是我的连接失败啊，原因在何处啊？

各位高手帮着分析一下啊
谢谢了

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1楼2011-08-08 08:17:43

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天使托

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T.Shen

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-08 18:17:20
暗夜懒猫(金币+1): 2011-08-25 08:13:55

这种情况我很少遇到，不过你可以进一步进行一下提质粒，然后双酶切验证一下；
或者重新进行连接，然后进行PCR验证，不过按照你图中那些条带应该都是你选取的样进行PCR的吧？我就很奇怪了，为什么P出来的大小基本都一样呢？如果是非特异性的话，那么不应该全部都是非特异性的；
建议你先提取质粒酶切看看，然后再做定夺。。。