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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接PCR检测
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DXY1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 希望继续交流 2011-08-08 18:17:41
暗夜懒猫(金币+1): 2011-08-25 08:14:07
用菌液做PCR不是很可靠，因为在菌液中除了你的目的基因外，还有其他的基因，你不能保证你的引物只会扩增出你的目的基因，也会扩增出其他的基因，除非你把菌的整个基因组都测序一遍，确定你的引物就只会扩增你的目的基因。
用菌液做PCR一般是运用于槽式PCR，你把质粒提出再做PCR，看看结果
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11楼2011-08-08 15:04:50
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lhl0538

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-08 18:17:50
质粒的凝胶电泳条带不是一条，因为质粒有不同的存在形式。
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12楼2011-08-08 15:19:55
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by wzqno at 2011-08-08 14:55:31:
加样孔在下面，那最上面的是引物二聚体吧，可能就是因为引物特异性不好，所以剩余的引物形成二聚体了，不过既然之前PCR克隆基因的时候都没问题，这就比较费解了

引物二聚体我看到了，你仔细看一下图，中间好几个点样孔还有两条带
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13楼2011-08-08 23:29:56
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 天使托 at 2011-08-08 11:28:08:
这种情况我很少遇到，不过你可以进一步进行一下提质粒，然后双酶切验证一下；
或者重新进行连接，然后进行PCR验证，不过按照你图中那些条带应该都是你选取的样进行PCR的吧？我就很奇怪了，为什么P出来的大小基本 ...

酶切验证后也无想要的片段，难道是连接失败了，那板上出的假阳性也太多了，假阳性产生的原因是什么啊，怎么避免啊。
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14楼2011-08-13 18:41:35
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