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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[求助] 连接PCR检测

对连接转化挑取的菌液进行PCR反应,为了验证连接成功,扩增载体上的目的基因2000bp, 为什么会出来小分子量1000左右的条带啊 ,是PCR的问题,还是我的连接失败啊,原因在何处啊?



各位高手帮着分析一下啊
谢谢了
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-08 09:38:41:
1.可能是你的引物特异性不好,在模板的其他位置有非特异性扩增
2.还有一个原因是气溶胶的污染
你的目的条带已经扩出来说明应该是连上了,再做的酶切验证一下

您的意思是扩增出其他位置的非目的基因片段? 由此也可推断目的基因可能连上了。   有没有可能会扩增到载体某个位置的片段啊?
6楼2011-08-08 10:07:09
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查看全部 14 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-08 18:16:42
出现过同样的问题,
可能是引物特异性不好,扩增出载体的部分片段造成的,建议选择一两个亮点的,提质粒酶切鉴定看看。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-08-08 08:38:26
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-08-08 18:16:54
你之前PCR的时候很完整么??还有你连得是T载体还是通过酶切位点连接的??怀疑你的引物有问题,特异性不好
3楼2011-08-08 09:31:57
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-08 18:17:04
1.可能是你的引物特异性不好,在模板的其他位置有非特异性扩增
2.还有一个原因是气溶胶的污染
你的目的条带已经扩出来说明应该是连上了,再做的酶切验证一下
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-08-08 09:38:41
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