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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 硫酸铵沉淀蛋白质
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zhougama

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1楼 2011-07-12 21:37:49
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zsy1106

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+5): 受教了，谢谢啦！ 2011-07-12 22:52:01
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-07-13 07:52:45
这个要根据的蛋白来说。有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是，把硫酸铵配成饱和溶液，把蛋白溶液置于冰浴上，再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中，最好边加边搅拌，避免局部硫胺浓度过高，但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后，最好放冰箱静置至少2h，充分沉淀后离心即可。
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2楼2011-07-12 22:01:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, EPI+1): 2011-07-13 07:52:04
zhougama(金币+5): 2011-07-13 10:21:05
4M的硫酸铵pH值为4.6，在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性，要小心。

硫酸铵会破坏蛋白质水化层，最好是缓和地加入。边加入边搅拌，如果在磁力搅拌器上搅拌，小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性，使得溶液粘度增加，泡沫难破，那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。

硫酸铵配制成饱和溶液有困难，理论上25度硫酸铵的溶解度为不到80克，饱和溶液是一升的体积内有800克，使得不能溶解的硫酸铵析出，保持100%饱和度。照理说5M（660g/L，远低于溶解度）的浓度是可以配制的，但会出现结晶。所以我认为饱和溶液是很难准确的。而且用饱和溶液来沉淀的时候，假如要达到90%的饱和度，那么蛋白质溶液的体积将要变为原来的10倍，不知道楼主在不在意体积变化。
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3楼2011-07-12 23:21:46
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zsy1106

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-13 19:35:02
zhougama(金币+2): 2011-07-14 11:29:38
大多数蛋白在50%硫酸铵的饱和度时即可充分沉淀，当然不排除少数例外啊。至于蛋白溶液的体积，我觉得不必在意，因为看楼主的意思，是要让蛋白沉淀下来，那么上清体积多大，应该不重要，而沉淀的蛋白，如果希望浓度高一点，体积小一点，沉淀后吹溶的时候，吹溶液体少加一些就可以了。
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4楼2011-07-13 10:15:39
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zhougama

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5楼2011-07-13 10:22:38
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德克士27

金虫 (小有名气)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+1): 2011-07-14 11:30:09
我不赞同配成饱和溶液，直接加固体比较好，至于加的速度还是越慢越好！
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6楼2011-07-13 19:52:20
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xbingfeng

新虫 (初入文坛)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+1): 2011-07-14 11:30:07
加固体比较好，加得越慢越好。 如果加快了，会造成局部浓度过大，造成意想不到的沉淀。
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7楼2011-07-13 20:38:14
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lfs198721

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+1): 2011-07-14 11:30:03
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-14 23:46:53
硫酸铵的饱和溶液挺难配的，建议你先用研钵把硫酸铵固体研细，在根据你温度的选择缓慢的添加就可以了。
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8楼2011-07-14 11:06:15
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zhougama

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9楼2011-07-14 21:30:07
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zhougama

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10楼2011-07-14 21:30:43
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zhougama

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11楼2011-07-14 21:31:04
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glc880824

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有加固体硫酸铵比较简单的方法，如流加装置什么的？
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12楼2012-11-03 21:41:51
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zhougama

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13楼2012-11-04 14:19:10
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glc880824

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没设计出来，尝试过
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14楼2012-11-04 21:00:35
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rlesher

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不会发帖借恢复了，0.01mol/L氨基乙酸溶液的等电点能够确定吗？
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15楼2012-11-04 22:48:48
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zhougama

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16楼2012-11-05 09:24:23
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yanzi_janney

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为了避免提及变化，直接加入固体硫酸铵，不过边加边搅拌，一点点加，防止部分浓度偏高，产生蛋白质变性
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17楼2013-01-24 20:46:45
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