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zhougama

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zhougama

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9楼2011-07-14 21:30:07
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zsy1106

金虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+5): 受教了,谢谢啦! 2011-07-12 22:52:01
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-07-13 07:52:45
这个要根据的蛋白来说。有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是,把硫酸铵配成饱和溶液,把蛋白溶液置于冰浴上,再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中,最好边加边搅拌,避免局部硫胺浓度过高,但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后,最好放冰箱静置至少2h,充分沉淀后离心即可。
2楼2011-07-12 22:01:05
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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, EPI+1): 2011-07-13 07:52:04
zhougama(金币+5): 2011-07-13 10:21:05
4M的硫酸铵pH值为4.6,在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性,要小心。

硫酸铵会破坏蛋白质水化层,最好是缓和地加入。边加入边搅拌,如果在磁力搅拌器上搅拌,小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性,使得溶液粘度增加,泡沫难破,那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。

硫酸铵配制成饱和溶液有困难,理论上25度硫酸铵的溶解度为不到80克,饱和溶液是一升的体积内有800克,使得不能溶解的硫酸铵析出,保持100%饱和度。照理说5M(660g/L,远低于溶解度)的浓度是可以配制的,但会出现结晶。所以我认为饱和溶液是很难准确的。而且用饱和溶液来沉淀的时候,假如要达到90%的饱和度,那么蛋白质溶液的体积将要变为原来的10倍,不知道楼主在不在意体积变化。
3楼2011-07-12 23:21:46
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zsy1106

金虫 (小有名气)


★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-13 19:35:02
zhougama(金币+2): 2011-07-14 11:29:38
大多数蛋白在50%硫酸铵的饱和度时即可充分沉淀,当然不排除少数例外啊。至于蛋白溶液的体积,我觉得不必在意,因为看楼主的意思,是要让蛋白沉淀下来,那么上清体积多大,应该不重要,而沉淀的蛋白,如果希望浓度高一点,体积小一点,沉淀后吹溶的时候,吹溶液体少加一些就可以了。
4楼2011-07-13 10:15:39
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