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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 硫酸铵沉淀蛋白质
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zhougama

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1楼 2011-07-12 21:37:49
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xbingfeng

新虫 (初入文坛)
★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+1): 2011-07-14 11:30:07
加固体比较好，加得越慢越好。 如果加快了，会造成局部浓度过大，造成意想不到的沉淀。
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7楼2011-07-13 20:38:14
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zsy1106

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
zhougama(金币+5): 受教了，谢谢啦！ 2011-07-12 22:52:01
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-07-13 07:52:45
这个要根据的蛋白来说。有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是，把硫酸铵配成饱和溶液，把蛋白溶液置于冰浴上，再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中，最好边加边搅拌，避免局部硫胺浓度过高，但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后，最好放冰箱静置至少2h，充分沉淀后离心即可。
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2楼2011-07-12 22:01:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhougama(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+6, EPI+1): 2011-07-13 07:52:04
zhougama(金币+5): 2011-07-13 10:21:05
4M的硫酸铵pH值为4.6，在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性，要小心。

硫酸铵会破坏蛋白质水化层，最好是缓和地加入。边加入边搅拌，如果在磁力搅拌器上搅拌，小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性，使得溶液粘度增加，泡沫难破，那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。

硫酸铵配制成饱和溶液有困难，理论上25度硫酸铵的溶解度为不到80克，饱和溶液是一升的体积内有800克，使得不能溶解的硫酸铵析出，保持100%饱和度。照理说5M（660g/L，远低于溶解度）的浓度是可以配制的，但会出现结晶。所以我认为饱和溶液是很难准确的。而且用饱和溶液来沉淀的时候，假如要达到90%的饱和度，那么蛋白质溶液的体积将要变为原来的10倍，不知道楼主在不在意体积变化。
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3楼2011-07-12 23:21:46
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zsy1106

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-13 19:35:02
zhougama(金币+2): 2011-07-14 11:29:38
大多数蛋白在50%硫酸铵的饱和度时即可充分沉淀，当然不排除少数例外啊。至于蛋白溶液的体积，我觉得不必在意，因为看楼主的意思，是要让蛋白沉淀下来，那么上清体积多大，应该不重要，而沉淀的蛋白，如果希望浓度高一点，体积小一点，沉淀后吹溶的时候，吹溶液体少加一些就可以了。
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4楼2011-07-13 10:15:39
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