应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达标签的切除，及信号肽的影响
61/1返回列表
查看: 3862  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 原核表达标签的切除，及信号肽的影响

请问高手，我的蛋白序列（G-细菌的）预测着在前28位为信号肽，可能分泌到周质中发挥作用，请问：
1）如果要做酶动力学及用此纯化蛋白（酶）体外反应体系筛化合物，要不要把信号肽去掉，即直接表达的蛋白序列为（29-后）。若表达全序列，信号肽对酶动力及蛋白结构影响大吗？
2）要去掉his-tag（杂志要求的），一般用啥酶切好，能够尽可能甚至无剩余氨基酸，而且酶切效率高，及酶切时目的蛋白损失少，蛋白酶好去除。请推荐蛋白酶及相应载体。
   谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
学会感恩，强大自我
1楼 2011-05-16 22:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-17 08:39:11
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构，也影响蛋白的性质，包括活性，异源表达一般是表达成熟肽部分的，因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK，切割后无剩余氨基酸，构建融合基因时把his-tag编码序列加5‘端，然后肠激酶酶切位点（DDDDK）编码序列，再后面就是你的成熟肽编码序列，表达后就是his-tag-DDDDK-成熟肽，酶切在K后面，得到无剩余氨基酸的成熟肽，没切割或者切割剩下的his-tag-DDDDK可以亲和层析去除。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-17 07:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 07:43:13:
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构，也影响蛋白的性质，包括活性，异源表达一般是表达成熟肽部分的，因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK，切割后无剩余氨基酸，构建融合基因时把his-tag编码序列 ...

谢谢，请问你之前用过EK酶切吗，我看网上有的说EK酶切效率低，相对较昂贵，且酶切后回收时形成沉淀，蛋白损失大。另，EK酶怎么去除呢。能详细说一下吗
谢谢
赞一下 回复此楼
学会感恩，强大自我
3楼2011-05-17 09:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
youngsun50(金币+2): 2011-05-17 13:05:08
西瓜(金币+3): 鼓励！ 2011-05-17 16:45:54
youngsun50(金币+3): 2011-05-19 16:52:41
引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-17 09:19:25:
谢谢，请问你之前用过EK酶切吗，我看网上有的说EK酶切效率低，相对较昂贵，且酶切后回收时形成沉淀，蛋白损失大。另，EK酶怎么去除呢。能详细说一下吗
谢谢

用过，我们EK自己工程菌制备的。EK效率挺高的，酶切后是否形成沉淀跟目标蛋白性质有关系的。EK的去除用STI亲和层析或者苯甲醚柱亲和层析，流穿就去除EK了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-17 10:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yipinyoulan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1225633楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 07:43:13
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构，也影响蛋白的性质，包括活性，异源表达一般是表达成熟肽部分的，因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK，切割后无剩余氨基酸，构建融合基因时把his-tag编码序列加 ...

本人新手，做分泌表达，请问下：信号肽（SP）是加在his-tag的前面，还是成熟肽前面？也就是说是这样吗——SP-his-tag-DDDDK-成熟肽？
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-21 14:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
1578134楼: Originally posted by yipinyoulan at 2012-09-21 14:30:13
本人新手，做分泌表达，请问下：信号肽（SP）是加在his-tag的前面，还是成熟肽前面？也就是说是这样吗——SP-his-tag-DDDDK-成熟肽？...

信号肽（SP）在N端。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-09-21 20:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 youngsun50 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +6 scalable 2026-08-24 6/300 2026-08-24 20:28 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭