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michacel1217银虫 (小有名气)
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求助肠激酶酶切融合蛋白 已有1人参与
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| 现在在做一个融合蛋白（序列，表达都正确），带有肠激酶位点，位于两个蛋白中间，想经肠激酶切割后获得肠激酶后面的蛋白，试了不同的反应体系（融合蛋白过量、酶过量都尝试过，看到有的文献Buffer里加有Tween，也都试过，始终切割不下来），做考染始终无法看出，其中，肠激酶已证明有活性。后来我将融合蛋白煮沸10min，再做酶切，可以看见在预期大小的位置有一条微弱的带，但是因为煮沸后蛋白肯定变性，无法用于后期的细胞实验，所以煮沸方法不可取。故想请教各位大神，有什么好的办法或者思路，望大家帮忙指点，不胜感激。 |
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