| 查看: 1946 | 回复: 8 | ||
michacel1217银虫 (小有名气)
|
[求助]
求助肠激酶酶切融合蛋白 已有1人参与
|
| 现在在做一个融合蛋白（序列，表达都正确），带有肠激酶位点，位于两个蛋白中间，想经肠激酶切割后获得肠激酶后面的蛋白，试了不同的反应体系（融合蛋白过量、酶过量都尝试过，看到有的文献Buffer里加有Tween，也都试过，始终切割不下来），做考染始终无法看出，其中，肠激酶已证明有活性。后来我将融合蛋白煮沸10min，再做酶切，可以看见在预期大小的位置有一条微弱的带，但是因为煮沸后蛋白肯定变性，无法用于后期的细胞实验，所以煮沸方法不可取。故想请教各位大神，有什么好的办法或者思路，望大家帮忙指点，不胜感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
假如你的研究生提出不合理要求
已经有4人回复
-
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有27人回复
-
所感
已经有3人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
-
不自信的我
已经有11人回复
-
北核录用
已经有3人回复
-
实验室接单子
已经有3人回复
-
磺酰氟产物，毕不了业了！
已经有8人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有10人回复
-
26申博（荧光探针方向，有机合成）
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体
已经有19人回复
- 求解惑：酶的活性和蛋白的表达有怎样的区别
已经有6人回复
- 怎样能得到高纯度的蛋白？
已经有10人回复
- pET-30a(+)不表达
已经有16人回复
- 共表达酶的优化问题
已经有5人回复
- 目的基因合成在大肠杆菌里能表达么？
已经有3人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- XcmI酶切不开的可能原因
已经有8人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 融合蛋白不挂柱，急！
已经有7人回复
- 蛋白降解的问题
已经有11人回复
- 辣根过氧化物酶（HRP）能与其他蛋白融合表达吗？？
已经有4人回复
- 原核表达标签的切除，及信号肽的影响
已经有5人回复
- 关于蛋白重组表达的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】组氨酸标签的设计
已经有7人回复
- 【求助/交流】为什么酶切总是切不开？
已经有12人回复
- 【求助/交流】谁知道如何去除GST标签啊，帮帮忙啊，急！
已经有4人回复
2楼2015-03-10 13:40:02
michacel1217
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 479.4
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 137.9小时
- 虫号: 2471441
- 注册: 2013-05-19
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2015-03-10 16:49:43
4楼2015-03-10 23:07:30
5楼2015-03-10 23:09:08
michacel1217
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 479.4
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 137.9小时
- 虫号: 2471441
- 注册: 2013-05-19
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2015-03-11 00:32:40
michacel1217
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 479.4
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 137.9小时
- 虫号: 2471441
- 注册: 2013-05-19
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2015-03-11 00:34:35
8楼2015-03-19 10:05:42
michacel1217
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 479.4
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 137.9小时
- 虫号: 2471441
- 注册: 2013-05-19
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2015-03-26 21:00:06