24小时热门版块排行榜    

查看: 2254  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

michacel1217

银虫 (小有名气)

[求助] 求助肠激酶酶切融合蛋白 已有1人参与

现在在做一个融合蛋白(序列,表达都正确),带有肠激酶位点,位于两个蛋白中间,想经肠激酶切割后获得肠激酶后面的蛋白,试了不同的反应体系(融合蛋白过量、酶过量都尝试过,看到有的文献Buffer里加有Tween,也都试过,始终切割不下来),做考染始终无法看出,其中,肠激酶已证明有活性。后来我将融合蛋白煮沸10min,再做酶切,可以看见在预期大小的位置有一条微弱的带,但是因为煮沸后蛋白肯定变性,无法用于后期的细胞实验,所以煮沸方法不可取。故想请教各位大神,有什么好的办法或者思路,望大家帮忙指点,不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luliangwmll

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么要冻干后重新溶解,肠激酶还是很好切的。你要看看你的肠激酶来源是否可靠,酶切buffer是否正确。
4楼2015-03-10 23:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

匿名

本帖仅楼主可见
2楼2015-03-10 13:40:02
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

michacel1217

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-03-10 13:40:02
我做融合表达蛋白,用凝血酶来切掉gst
标签,你是在柱子上切的吗?

不是,我是将融合蛋白纯化冻干后重新溶解,再使用肠激酶酶切。
3楼2015-03-10 16:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luliangwmll

新虫 (初入文坛)

亲,你的融合蛋白有3c酶酶切位点吗?如果有我们可以免费给你提供些3C酶的试用装,柱上切或者溶液体系切都没问题。
5楼2015-03-10 23:09:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 14:58 by QXtWNz7PI7wZ
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 3/150 2026-08-15 14:53 by QXtWNz7PI7wZ
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +7 majunge000 2026-08-11 9/450 2026-08-15 13:34 by kiz2011
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见