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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 信号肽序列必须与基因序列一起做融合蛋白才能起作用吗？
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walker2898

银虫 (小有名气)

[求助] 信号肽序列必须与基因序列一起做融合蛋白才能起作用吗？ 已有2人参与

各位大神，小弟现在要在基因前面加信号肽序列，不知道直接把信号肽序列加在基因序列前面就行，还是得将两个序列做融合基因才能起作用啊？求大神指导，或提供参考文献，谢谢啊！缘分啊！
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1楼 2014-03-14 10:31:56
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:46:34
walker2898: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-17 10:18:40
假设你用的是e.coli表达系统，如果你是分泌到细胞外，就需要加pre-pro-序列，
如果是分泌到periplasm，加入pro-sequence就可以了，
也有笼统的直接叫leader sequence（信号肽，或者前导序列）
直接加到目的片段就可以，
需要注意的是，有些蛋白在cytoplasm里面折叠才有活性，有的需要在periplasm折叠才行。
Good Luck!
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-03-14 21:03:47
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walker2898

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-14 21:03:47
假设你用的是e.coli表达系统，如果你是分泌到细胞外，就需要加pre-pro-序列，
如果是分泌到periplasm，加入pro-sequence就可以了，
也有笼统的直接叫leader sequence（信号肽，或者前导序列）
直接加到目的片段就 ...

我是构建植物表达载体，转到植物基因组中进行表达，让基因到叶绿体中产生蛋白，所以不知道信号肽序列和基因序列之间还用加什么序列吗？还有构建融合基因是怎么构建的？谢谢！
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3楼2014-03-17 10:18:18
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
walker2898: 金币+2, ★有帮助 2014-03-21 08:43:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by walker2898 at 2014-03-17 10:18:18
我是构建植物表达载体，转到植物基因组中进行表达，让基因到叶绿体中产生蛋白，所以不知道信号肽序列和基因序列之间还用加什么序列吗？还有构建融合基因是怎么构建的？谢谢！...

用PCR的方法，，把你的信号肽序列通过引物的方法，融合到你目的基因的N端。
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4楼2014-03-17 21:55:40
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-14 21:03:47
假设你用的是e.coli表达系统，如果你是分泌到细胞外，就需要加pre-pro-序列，
如果是分泌到periplasm，加入pro-sequence就可以了，
也有笼统的直接叫leader sequence（信号肽，或者前导序列）
直接加到目的片段就 ...

如果我要表达一个蛋白，但是这个蛋白分为两个亚基a 和b,做原核表达载体用pet-32a,我是需要把两个亚基的成熟肽串联到一起转入pet32a吗，顺序会有影响吗，设计酶切位点的引物时，要不要考虑这个问题
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
5楼2015-08-19 16:09:14
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
Neb有一种载体，叫Duet？ 就是同一个质粒表达两个多肽（蛋白质）

也可以设计把两个蛋白放在一起，第一个基因只是以TAA结尾，然后紧接着ATG，这样核糖体就可以从前面合成直接滑到后面开始新的多肽的合成。找找文献吧，（TAATG）
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行至水穷处，坐看云起时
6楼2015-08-19 18:23:44
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