应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达标签的切除，及信号肽的影响
61/1返回列表
查看: 3880  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 原核表达标签的切除，及信号肽的影响

请问高手，我的蛋白序列（G-细菌的）预测着在前28位为信号肽，可能分泌到周质中发挥作用，请问：
1）如果要做酶动力学及用此纯化蛋白（酶）体外反应体系筛化合物，要不要把信号肽去掉，即直接表达的蛋白序列为（29-后）。若表达全序列，信号肽对酶动力及蛋白结构影响大吗？
2）要去掉his-tag（杂志要求的），一般用啥酶切好，能够尽可能甚至无剩余氨基酸，而且酶切效率高，及酶切时目的蛋白损失少，蛋白酶好去除。请推荐蛋白酶及相应载体。
   谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
学会感恩，强大自我
1楼 2011-05-16 22:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-17 08:39:11
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构，也影响蛋白的性质，包括活性，异源表达一般是表达成熟肽部分的，因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK，切割后无剩余氨基酸，构建融合基因时把his-tag编码序列加5‘端，然后肠激酶酶切位点（DDDDK）编码序列，再后面就是你的成熟肽编码序列，表达后就是his-tag-DDDDK-成熟肽，酶切在K后面，得到无剩余氨基酸的成熟肽，没切割或者切割剩下的his-tag-DDDDK可以亲和层析去除。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-17 07:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 07:43:13:
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构，也影响蛋白的性质，包括活性，异源表达一般是表达成熟肽部分的，因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK，切割后无剩余氨基酸，构建融合基因时把his-tag编码序列 ...

谢谢，请问你之前用过EK酶切吗，我看网上有的说EK酶切效率低，相对较昂贵，且酶切后回收时形成沉淀，蛋白损失大。另，EK酶怎么去除呢。能详细说一下吗
谢谢
赞一下 回复此楼
学会感恩，强大自我
3楼2011-05-17 09:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
youngsun50(金币+2): 2011-05-17 13:05:08
西瓜(金币+3): 鼓励！ 2011-05-17 16:45:54
youngsun50(金币+3): 2011-05-19 16:52:41
引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-17 09:19:25:
谢谢，请问你之前用过EK酶切吗，我看网上有的说EK酶切效率低，相对较昂贵，且酶切后回收时形成沉淀，蛋白损失大。另，EK酶怎么去除呢。能详细说一下吗
谢谢

用过，我们EK自己工程菌制备的。EK效率挺高的，酶切后是否形成沉淀跟目标蛋白性质有关系的。EK的去除用STI亲和层析或者苯甲醚柱亲和层析，流穿就去除EK了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-17 10:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yipinyoulan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1225633楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 07:43:13
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构，也影响蛋白的性质，包括活性，异源表达一般是表达成熟肽部分的，因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK，切割后无剩余氨基酸，构建融合基因时把his-tag编码序列加 ...

本人新手，做分泌表达，请问下：信号肽（SP）是加在his-tag的前面，还是成熟肽前面？也就是说是这样吗——SP-his-tag-DDDDK-成熟肽？
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-21 14:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
1578134楼: Originally posted by yipinyoulan at 2012-09-21 14:30:13
本人新手，做分泌表达，请问下：信号肽（SP）是加在his-tag的前面，还是成熟肽前面？也就是说是这样吗——SP-his-tag-DDDDK-成熟肽？...

信号肽（SP）在N端。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-09-21 20:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 youngsun50 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:14 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:40 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭