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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 原核表达标签的切除,及信号肽的影响

请问高手,我的蛋白序列(G-细菌的)预测着在前28位为信号肽,可能分泌到周质中发挥作用,请问:
1)如果要做酶动力学及用此纯化蛋白(酶)体外反应体系筛化合物,要不要把信号肽去掉,即直接表达的蛋白序列为(29-后)。若表达全序列,信号肽对酶动力及蛋白结构影响大吗?
2)要去掉his-tag(杂志要求的),一般用啥酶切好,能够尽可能甚至无剩余氨基酸,而且酶切效率高,及酶切时目的蛋白损失少,蛋白酶好去除。请推荐蛋白酶及相应载体。
   谢谢
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学会感恩,强大自我
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youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 07:43:13:
1、信号肽未切割影响蛋白的空间结构,也影响蛋白的性质,包括活性,异源表达一般是表达成熟肽部分的,因为原来的信号肽不能被识别和切割。
2、用肠激酶EK,切割后无剩余氨基酸,构建融合基因时把his-tag编码序列 ...

谢谢,请问你之前用过EK酶切吗,我看网上有的说EK酶切效率低,相对较昂贵,且酶切后回收时形成沉淀,蛋白损失大。另,EK酶怎么去除呢。能详细说一下吗
谢谢
学会感恩,强大自我
3楼2011-05-17 09:19:25
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