应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手求助western blot
231/1返回列表
查看: 3795  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-05-01 10:20:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2011-05-01 11:08:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 不错 学习 2011-05-01 14:30:51
西瓜(金币+1, EPI+1): 昨天漏了，补上 2011-05-02 08:41:05
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:28
给你一个转缓的配方
Tris  3.029g
Glycine  14.4g
SDS   0.1g
甲醇200ml
总体积1L
25KD的蛋白，300mA转膜30~40min即可。
另外要注意你所用膜的质量，有时候转不上可能是膜过期了，PVDF膜需要先用甲醇活化后再使用。GOOD  LUCK!
赞一下(4人) 回复此楼
3楼2011-05-01 11:27:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-05-01 12:07:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 都是高手啊 2011-05-01 14:31:10
西瓜: 鼓励交流 2011-05-02 00:37:55
西瓜(金币+1, EPI+1): 2011-05-02 00:38:28
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:24
引用回帖:
Originally posted by lofty23 at 2011-05-01 12:07:28:
谢谢！PVDF膜式可以用的，我们的内参的转上了的！

12%的胶。
PVDF 膜的的孔径是0.22 um。
转移缓冲液的配方：
甘氨酸：2.9g
TRIS:5.8g
SDS:0.37g
甲醇：200ml
定容至1L。
60v转移2h。
祝你成功，我们配方很好用的。
赞一下(4人) 回复此楼
5楼2011-05-01 12:32:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2011-05-01 13:05:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-05-02 00:36:33
0.45的可以，不过小蛋白尽量还是不要加入SDS
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-05-01 22:56:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
lofty23(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-05-01 22:56:29:
0.45的可以，不过小蛋白尽量还是不要加入SDS

为什么呢？呵呵~我想学习下，请赐教哦~
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-02 00:37:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 热心啊，价格都给了 2011-05-02 12:55:14
引用回帖:
Originally posted by lofty23 at 2011-05-01 13:05:39:
用0.45的膜可以吗？我现在没有0.22的膜!

用0.45的膜肯定转不上去，我有亲身经历，0.22的milipore的PVDF膜很好用的。每卷大约2000元左右。试试吧。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-05-02 08:16:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
10楼2011-05-02 09:30:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
11楼2011-05-02 09:31:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘忧草1

银虫 (小有名气)
★
lofty23(金币+1):谢谢参与
我们都要用SDS的呀
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-05-02 10:11:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good，继续加油哦 2011-05-02 11:01:03
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:25:17
12%的胶。
PVDF 膜的的孔径是0.45 um。
转移缓冲液的配方：
Tris  3.029g
Glycine  14.4g
甲醇200ml
定容至1L。
100mA(40V左右)转移1h。
我的蛋白是19KD的，可以做出可重复的结果。
另外，SDS等去垢剂影响膜和蛋白的结合，抵消掉一部分甲醇固定的作用。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2011-05-02 10:31:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-05-02 12:26:47
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-02 00:37:03:
为什么呢？呵呵~我想学习下，请赐教哦~

SDS等去垢剂影响膜和蛋白的结合，抵消掉一部分甲醇固定的作用。
所以小分子量的蛋白尽量不要引入SDS，大分子量的倒是没有太大关系。
反正我就是这么弄得，我用0.44的膜可以做10几kD的蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2011-05-02 10:34:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liang8887

至尊木虫 (文坛精英)
★
lofty23(金币+1):谢谢参与
祝好运！
回复此楼
15楼2011-05-02 10:43:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tigertang

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5): 欢迎交流 2011-05-02 12:26:34
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:39:13
25kd
最好跑12%的胶
转膜液没有必要加SDS
PVDF和NC膜都行（只是pvdf一定要甲醇处理）
0.22 和0.45 在这没有太大区别
转膜90v 1h足够（冰浴）
赞一下(2人) 回复此楼
16楼2011-05-02 11:37:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
17楼2011-05-02 13:24:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
18楼2011-05-02 13:25:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viacould

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-05-03 00:41:04
本帖内容被屏蔽
19楼2011-05-02 16:48:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
20楼2011-05-02 23:00:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

noah1020

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
lofty23(金币+1): 2011-05-14 07:48:01
西瓜(金币+3): 补上~鼓励！ 2011-05-14 07:50:11
楼主你用的系统貌似和我的一样~我的分子量是30kD，之前我用恒压法转过，貌似有些会转过头~现在一直是200mA转膜1.5h~转膜的时候一定要把槽子里的冰盒加上，还有最好在外面放一盆冰，把槽子放在冰中~这样可以降低转膜过程中产热造成的蛋白降解~ 你转完膜可以试试用丽春红染色，10min，应该可以出现蛋白条带的，然后再洗洗接着blocking和后续孵育抗体就行~
赞一下(2人) 回复此楼
21楼2011-05-13 13:09:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lofty23

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
22楼2011-05-14 07:48:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江心洲

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lz那个你们考马斯亮蓝的配方是多少？我是新手 老是做不出来啊 急
赞一下 回复此楼
23楼2013-06-04 09:25:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lofty23 的主题更新
231/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭